反式白藜芦醇对痴呆大鼠海马nmdar1尧nmdar2a表达的影响

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1、反式白藜芦醇对痴呆大鼠海马NMDAR1尧NMDAR2A表达的影响王顺旺1叶水龙1许文勇1刘文娟1徐平21.厦门市第三医院神经内科，福建厦门361100；2.遵义医学院附属医院，贵州遵义563003[摘要]目的探讨反式白藜芦醇（TR，Trans-Resveratrol）对Aβ25-35损伤大鼠海马NMDA受体NR1、NR2A亚基表达的影响。方法选择经莫式水迷宫(M)训练合格的大鼠，随机分为6组：假手术组；模型组；TR高剂量组、TR中剂量组、TR低剂量组、安理申对照组。模型组通过在大鼠海马内注射Aβ25-35制模获得，在模型组基础上分别用TR高、中、低剂量TR干预获得TR高剂量组、TR中剂量组、T

2、R低剂量组，同时用安理申干预获得安理申对照组，每组6只，采用实时聚合酶链反应法(realtimePCR)检测6组大鼠海马NMDA受体NR1、NR2A表达。结果在M中模型组逃避潜伏期比TR高、中、低剂量组、安理申组和假手术组明显延长，各组NMDA受体NR1表达分别为(0.14±0.04),(1.51±0.54),(0.22±0.06),(0.37±0.08,0.61)±0.15)(LODA受体NR2A表达分别为(0.12±0.07)、(1.72±0.34)、(0.16±0.06)、(0.21±0.08)、(0.52±0.15)、(0.67±0.16)。结论TR可能有下调海马NMDAR1、NMDA

3、R2A受体表达，从而减少海马细胞凋亡的作用。.jyqkix等PCR试剂购自生工生物工程（上海）有限公司。1.2仪器冷冻离心机（德国5417R）、紫外可见分光光度计（TU-1810）、湘仪H1650-orris水迷宫等。1.3动物模型制备选择经莫式水迷宫(M)训练合格的大鼠，随机分为6组：假手术组；模型组；TR高剂量组、TR中剂量组、TR低剂量组、安理申对照组。模型组通过在大鼠海马内注射Aβ25-35制模获得，在模型组基础上分别用TR高、中、低剂量TR干预获得TR高剂量组、TR中剂量组、TR低剂量组，同时用安理申干预获得安理申对照组。1.4NMDA受体NR1、NR2A表达检测利用RT-PCR检测

4、NMDA受体NR1、NR2A的表达，方法参照检测试剂盒进行，PCR反应条件采用两步法进行,具体步骤为：95℃，3min；65℃，3min。1.5统计方法应用SPSS18.0统计软件分析所有数据，计量资料以（x±s）表示，组间比较用Levene检验分析。2结果2．1各组NMDA受体NR1、NR2A表达各组NRI及NR2A的表达结果见表1，与模型组相比，各组NR1及NR2A的表达差异有统计学意义（P＜0.05），且高剂量组反式白藜芦醇干预组的NR1的表达明显减少，与中、低剂量反式白藜芦醇干预组相比效果好。2.2TR各剂量组海马凋亡细胞病理观察TR各剂量组海马凋亡细胞病理切片结果如图1所示，TR高剂

5、量组海马的凋亡细胞数明显低于TR低剂量组、对照组及模型组，TR低剂量组海马凋亡细胞数相对对照组及模型组较少。3讨论海马是人类脑部的重要区域，具有调解神经系统的发育的重要作用，是边缘系统的一个部分，海马受损是引起阿尔茨海默病的主要病因[6-7]。NMDA受体是谷氨酸受体的一种亚型，参与形成突触传递的长时增强过程，研究发现当海马神经元突触内NMDA受体被阻断时，细胞变性死亡将会增加[8-10]。海马中主要表达的NMDA受体有NR1和NR2A，NR1可以在细胞中单独表达有功能的同聚受体，但对激动反应很小，NR2A不能单独形成有功能的通道，只有和NR1组合才能表现活性，并使后者反应明显加强，所以把NR

6、1、NR2A放一起研究并起互相印证的作用[11-13]，研究发现，谷氨酸可能在神经病理变化及痴呆症状中起重要作用，在有痴呆的大鼠甘氨酸结合能力降低,提示NMDA受体的功能缺损，Lu等[15]采用免疫印迹法分析AD患者死后脑NR1下降39%,NR2B下降40%，提示NMDA受体的功能缺失后,AD患者嗅内皮质中NR1mRNA含量较正常人下降34%，而用用高压液相色谱分析脑组织标本中的右旋-天冬氨酸含量发现[16]AD患者的天冬氨酸较相同年龄正常对照组下降，但在神经病理变化较小的小脑中无明显变化，这些说明右旋-天冬氨酸的降低可能参与NMDA受体功能下调及记忆丧失的过程。Hasanein等[17]则发

7、现AD患者神经受损区具有特异性，Aβ25-35在AD患者脑内堆集、产生神经毒性可能是通过NMDA受体促进氧自由基的生成所引起的[18]，所以该实验通过检测NMDA受体含量变化，推测抗氧化药物白藜芦醇是否对痴呆大鼠有作用，结果发现随着TR剂量的增加，海马组织NMDA受体的表达减少，痴呆症状有所改善，TR对痴呆大鼠海马起到保护作用，TR对大脑海马的保护作用可能是通过下调海马中NMDA受体NR1及N2A