BJS 202209 食品中双醋酚丁等19种化合物的测定

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1犅犑犛２０２２０９食品中双醋酚丁等１９种化合物的测定１范围本方法规定了食品中阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、托吡酯、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、新利司他、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺的高效液相色谱串联质谱测定方法。本方法适用于压片糖果、蜜饯、果冻、除含乳饮料外的饮料、果蔬粉、饼干、代用茶、配制酒和果酒中阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、托吡酯、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、新利司他、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺的测定。２原理试样经５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）提取，经稀释、过滤膜后，采用液相色谱串联质谱仪检测，外标法定量。３试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１试剂３．１．１乙腈（Ｃ２Ｈ３Ｎ）。３．１．２甲醇（ＣＨ４Ｏ）。３．１．３甲酸（ＣＨ２Ｏ２）。３．１．４二甲基亚砜（Ｃ２Ｈ６ＯＳ）。３．１．５丙酮（Ｃ３Ｈ６Ｏ）。３．２试剂配制３．２．１５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）：量取１２５ｍＬ甲醇（３．１．２）和０．２５ｍＬ甲酸（３．１．３），加水稀释至２５０ｍＬ，混匀备用。３．２．２０．１％甲酸水溶液：量取甲酸１ｍＬ（３．１．３），加水稀释至１０００ｍＬ，混匀备用。３．２．３０．１％甲酸乙腈溶液：量取甲酸１ｍＬ（３．１．３），加乙腈（３．１．１）稀释至１０００ｍＬ，混匀备用。３．３标准品阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、托吡酯、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、新利司他、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺标准品，纯度≥９６％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。１９种标准品的中文名称、英文名称、ＣＡＳ编号、分子式和相对分子质量见附录Ａ。３．４标准溶液配制３．４．１标准储备液（５００ｍｇ／Ｌ）：分别准确称取各标准品１２．５ｍｇ（精确至０．１ｍｇ），加乙腈（３．１．１）溶解，１

2犅犑犛２０２２０９然后分别转移至２５ｍＬ容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成质量浓度均为５００ｍｇ／Ｌ的标准储备液。氨苯蝶啶标准品溶解时需先使用２ｍＬ二甲基亚砜（３．１．４）溶解，然后用乙腈（３．１．１）定容。新利司他标准品溶解时需先使用２ｍＬ丙酮（３．１．５）溶解，然后用乙腈（３．１．１）定容。－１８℃及以下避光保存，有效期６个月。３．４．２混合标准中间溶液：分别准确移取各标准储备液（３．４．１）０．１０ｍＬ（其中托吡酯和新利司他标准储备液各移取０．５０ｍＬ）于２５ｍＬ容量瓶中，用５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）（３．２．１）稀释并定容，配制成混合标准中间溶液，其中阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺的质量浓度均为２．０ｍｇ／Ｌ，托吡酯和新利司他的质量浓度均为１０．０ｍｇ／Ｌ。０℃～４℃避光保存，有效期１个月。３．４．３标准系列工作溶液：用空白基质提取液（５．２．３）将混合标准中间溶液（３．４．２）逐级稀释，配制成系列标准工作溶液，其中阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺的系列质量浓度为２．００ｎｇ／ｍＬ、５．００ｎｇ／ｍＬ、１０．０ｎｇ／ｍＬ、２０．０ｎｇ／ｍＬ、５０．０ｎｇ／ｍＬ和１００ｎｇ／ｍＬ，托吡酯和新利司他的系列质量浓度为１０．０ｎｇ／ｍＬ、２５．０ｎｇ／ｍＬ、５０．０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ和５００ｎｇ／ｍＬ，现用现配。３．５材料３．５．１微孔滤膜：０．２２μｍ，聚四氟乙烯滤膜。４仪器和设备４．１高效液相色谱串联质谱仪，配电喷雾离子源（ＥＳＩ）。４．２分析天平：感量分别为０．１ｍｇ和１ｍｇ。４．３超声波提取仪：工作频率不低于４０ｋＨｚ。４．４恒温水浴锅：水浴温度不低于８０℃。４．５离心机：转速不低于４０００ｒ／ｍｉｎ。４．６涡旋混合器。５分析步骤５．１试样制备和保存取３００ｇ试样或所有试样（试样低于３００ｇ时）充分搅碎、均质或粉碎混匀，蜜饯样品剪碎至２ｍｍ以下，果冻样品充分搅碎至浆状，含二氧化碳的液体样品通过加热或超声去除二氧化碳，含有乙醇的试样通过６０℃水浴加热去除乙醇。制备好的试样于４℃冰箱保存。５．２样品前处理５．２．１压片糖果、饮料、果蔬粉、饼干、代用茶、蜜饯、配制酒和果酒准确称取１．０ｇ（精确至０．００１ｇ）样品于２５ｍＬ具塞刻度离心管中，加入２０ｍＬ５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）（３．２．１），超声提取１０ｍｉｎ（超声过程中摇匀２～３次），冷却至室温，用５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）（３．２．１）稀释至刻度并摇匀。取５ｍＬ溶液经４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，精确吸取１．０ｍＬ离心后清液，用水稀释至２ｍＬ，涡旋均匀后用微孔滤膜（３．５．１）过滤，待高效液相色谱串联质谱仪测定。２

3犅犑犛２０２２０９５．２．２果冻、其他糖果准确称取１．０ｇ（精确至０．００１ｇ）样品于２５ｍＬ具塞刻度离心管中，加入１０ｍＬ水，８０℃水浴至样品溶解（水浴过程中注意摇散），冷却至室温，加入１０ｍＬ甲醇（３．１．２），超声提取１０ｍｉｎ（超声过程中摇匀２～３次），冷却至室温，用５０％甲醇溶液（含０．１％甲酸）（３．２．１）稀释至刻度并摇匀。取５ｍＬ溶液经４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，精确吸取１．０ｍＬ离心后清液，用水稀释至２ｍＬ，涡旋均匀后用微孔滤膜（３．５．１）过滤，待高效液相色谱串联质谱仪测定。５．２．３空白基质提取液选取阴性基质样品，按照５．２．１或５．２．２操作步骤进行基质提取液的制备。阴性基质样品中各目标物含量应在方法检出限以下。５．３仪器参考条件５．３．１色谱参考条件如下。ａ）色谱柱：Ｃ８柱，１．７μｍ，１００ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），或性能相当者。ｂ）流动相：Ａ为０．１％甲酸水溶液（３．２．２），Ｂ为０．１％甲酸乙腈溶液（３．２．３），梯度洗脱程序见表１。ｃ）流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ。ｄ）柱温：３０℃。ｅ）进样量：５μＬ。表１梯度洗脱程序表时间／ｍｉｎ流动相Ａ／％流动相Ｂ／％０．０９０１０２．０９０１０８．０３０７０１２．０５９５１７．０５９５１７．１９０１０２０．０９０１０５．３．２质谱参考条件如下。ａ）离子源：ＥＳＩ。ｂ）检测方式：多反应监测（ＭＲＭ）。ｃ）扫描方式：正离子模式和负离子模式。ｄ）气帘气（ＣＵＲ）、雾化气（ＧＳ１）、辅助气（ＧＳ２）、碰撞气（ＣＡＤ）均为氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，电喷雾电压（ＩＳ）、去簇电压（ＤＰ）、碰撞能（ＣＥ）等参数使用前应优化至最佳灵敏度，定量离子对和定性离子对等信息详见附录Ｂ。５．４标准曲线的制作将标准系列工作溶液（３．４．３）分别注入高效液相色谱串联质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作溶液中各化合物的质量浓度为横坐标，以对应化合物色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的色谱图参见附录Ｃ。３

4犅犑犛２０２２０９５．５试样溶液的测定５．５．１定性测定按照高效液相色谱串联质谱条件（５．３）测定试样溶液和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间和定量离子与定性离子的相对离子丰度。当试样中化合物色谱峰保留时间与标准溶液的保留时间相对偏差不大于２．５％，且定量离子与定性离子的相对离子丰度与浓度相当标准溶液中相对离子丰度（犽）偏差不超过表２规定的范围，则可确定试样中检出相应化合物。表２相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度犽／％犽＞５０２０＜犽≤５０１０＜犽≤２０犽≤１０最大允许偏差／％±２０±２５±３０±５０５．５．２定量测定将试样溶液（５．２）按仪器参考条件（５．３）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测物的浓度。试样溶液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释，同时用同等稀释倍数的空白基质配制标准曲线溶液后再测定。５．６空白试验除不加试样外，均按５．２步骤操作。６结果计算试样中各待测组分的含量按式（１）计算：（ρ－ρ０）×犞×犞２犡＝犿×犞１×１０００…………………………（１）式中：犡———试样中各待测组分的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；ρ———由标准曲线得到的试样溶液中各待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；ρ０———由标准曲线得到的空白溶液中各待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———稀释体积，单位为毫升（ｍＬ）；犞２———移取清液稀释后的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样称取的质量，单位为克（ｇ）；犞１———移取离心后清夜的体积，单位为毫升（ｍＬ）；１０００———换算系数。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。７精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的１５％。４

5犅犑犛２０２２０９８其他当取样量为１．０ｇ，定容体积为２５ｍＬ，移取体积１．０ｍＬ并稀释至２ｍＬ时，阿米洛利、茶碱、纳曲酮、氨苯蝶啶、脱乙酰比沙可啶、氯苯丁胺、苯甲吗酮、西酞普兰、帕罗西汀、苯佐卡因、舍曲林、奈法唑酮、螺内酯、双醋酚丁、依他尼酸、大黄素和唑尼沙胺的检出限均为０．０３ｍｇ／ｋｇ，定量限均为０．１０ｍｇ／ｋｇ；托吡酯和新利司他的检出限均为０．１５ｍｇ／ｋｇ，定量限均为０．５０ｍｇ／ｋｇ。５

6犅犑犛２０２２０９附录犃（资料性）双醋酚丁等１９种化合物相关信息双醋酚丁等１９种化合物相关信息见表Ａ．１。表犃．１双醋酚丁等１９种化合物的中文名称、英文名称、犆犃犛编号、分子式和相对分子质量序号中文名称英文名称ＣＡＳ编号分子式相对分子质量１阿米洛利Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ２６０９４６３Ｃ６Ｈ８ＣｌＮ７Ｏ２２９．６３２茶碱Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ５８５５９Ｃ７Ｈ８Ｎ４Ｏ２１８０．１６３纳曲酮Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ１６５９０４１３Ｃ２０Ｈ２３ＮＯ４３４１．４０４氨苯蝶啶Ｔｒｉａｍｔｅｒｅｎｅ３９６０１０Ｃ１２Ｈ１１Ｎ７２５３．２６５脱乙酰比沙可啶Ｄｅａｃｅｔｙｌｂｉｓａｃｏｄｙｌ６０３４１８Ｃ１８Ｈ１５ＮＯ２２７７．３２６氯苯丁胺Ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ４６１７８９Ｃ１０Ｈ１４ＣｌＮ１８３．６８７苯甲吗酮Ｆｅｎｍｅｔｒａｍｉｄｅ５５８８２９４Ｃ１１Ｈ１３ＮＯ２１９１．２３８西酞普兰Ｃｉｔａｌｏｐｒａｍ５９７２９３３８Ｃ２０Ｈ２１ＦＮ２Ｏ３２４．３９９苯佐卡因Ｂｅｎｚｏｃａｉｎｅ９４０９７Ｃ９Ｈ１１ＮＯ２１６５．１９１０托吡酯Ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ９７２４０７９４Ｃ１２Ｈ２１ＮＯ８Ｓ３３９．３６１１帕罗西汀Ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ６１８６９０８７Ｃ１９Ｈ２０ＦＮＯ３３２９．３７１２舍曲林Ｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ７９６１７９６２Ｃ１７Ｈ１７Ｃｌ２Ｎ３０６．２３１３奈法唑酮Ｎｅｆａｚｏｄｏｎｅ８３３６６６６９Ｃ２５Ｈ３２ＣｌＮ５Ｏ２４７０．０１１４螺内酯Ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ５２０１７Ｃ２４Ｈ３２Ｏ４Ｓ４１６．５７１５双醋酚丁Ｄｉａｏｔｙｌｄｉｐｈｅｎｏｌｉｓａｔｉｎｕｍ１１５３３３Ｃ２４Ｈ１９ＮＯ５４０１．４１１６新利司他Ｃｅｔｉｌｉｓｔａｔ２８２５２６９８１Ｃ２５Ｈ３９ＮＯ３４０１．５８１７唑尼沙胺Ｚｏｎｉｓａｍｉｄｅ６８２９１９７４Ｃ８Ｈ８Ｎ２Ｏ３Ｓ２１２．２３１８依他尼酸Ｅｔｈａｃｒｙｎｉｃａｃｉｄ５８５４８Ｃ１３Ｈ１２Ｃｌ２Ｏ４３０３．１４１９大黄素Ｅｍｏｄｉｎ５１８８２１Ｃ１５Ｈ１０Ｏ５２７０．２４６

7犅犑犛２０２２０９附录犅（资料性）质谱参考条件以下所列的质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作出适当调整。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。ａ）离子源：ＥＳＩ。ｂ）检测方式：ＭＲＭ。ｃ）扫描方式：正离子模式和负离子模式。ｄ）ＩＳ：５０００Ｖ（ＥＳＩ＋）；４５００Ｖ（ＥＳＩ－）。ｅ）离子源温度（ＴＥＭ）：５００℃。ｆ）ＧＳ１压力：３４５ｋＰａ（５０ｐｓｉ）。ｇ）ＧＳ２压力：３４５ｋＰａ（５０ｐｓｉ）。ｈ）ＣＵＲ压力：２７６ｋＰａ（４０ｐｓｉ）。ｉ）碰撞室出口电压（ＣＸＰ）：１０Ｖ。ｊ）离子化模式、母离子、子离子、去簇电压、碰撞能见表Ｂ．１。表犅．１双醋酚丁等１９种化合物定性离子、定量离子和质谱分析参数母离子子离子序号化合物名称扫描方式去簇电压／Ｖ碰撞能／ｅＶ保留时间／ｍｉｎ（犿／狕）（犿／狕）１７１．１ａ２５１阿米洛利ＥＳＩ＋２２９．９６０１．２７１４３．２３５１２４．２ａ２７２茶碱ＥＳＩ＋１８１．３８０１．９０９６．２３２３２４．２ａ２９３纳曲酮ＥＳＩ＋３４２．３８０２．８６２７０．２３９２３７．１ａ３６４氨苯蝶啶ＥＳＩ＋２５４．１１１５３．９８１９５．１４２１８４．２ａ２６５脱乙酰比沙可啶ＥＳＩ＋２７８．１７０４．３８１６７．２５０１２５．０ａ２６６氯苯丁胺ＥＳＩ＋１８４．３５０５．４２１６７．２１４１１７．１ａ２５７苯甲吗酮ＥＳＩ＋１９２．１８０６．０９１３４．３２０１０９．１ａ４０８西酞普兰ＥＳＩ＋３２５．２８０６．３４２６２．２２７１３８．１ａ１７９苯佐卡因ＥＳＩ＋１６６．１８０６．４８９４．２２５７

8犅犑犛２０２２０９表犅．１双醋酚丁等１９种化合物定性离子、定量离子和质谱分析参数（续）母离子子离子序号化合物名称扫描方式去簇电压／Ｖ碰撞能／ｅＶ保留时间／ｍｉｎ（犿／狕）（犿／狕）２６４．１ａ１４１０托吡酯ＥＳＩ＋３４０．２３０６．５１２８１．９９１９２．２ａ２８１１帕罗西汀ＥＳＩ＋３３０．１９０６．６２１５１．１３５２７５．２ａ１７１２舍曲林ＥＳＩ＋３０６．３５０７．０３１５９．１３３２７５．２ａ４１１３奈法唑酮ＥＳＩ＋４７１．３１２０７．０５２４７．２４９１０７．１ａ４２１４螺内酯ＥＳＩ＋３４１．３６０８．０９１８６．９３５２２４．１ａ２７１５双醋酚丁ＥＳＩ＋４０２．１８０８．２３２６６．２１６１６０．２ａ３５１６新利司他ＥＳＩ＋４０２．１４０１１．８１７７．９１６２４２．９ａ－１５１７依他尼酸ＥＳＩ－３００．９－７０８．２３２０６．９－３５２２４．８ａ－３６１８大黄素ＥＳＩ－２６８．９－１２０８．２５２４１．０－３８１１９．０ａ－２２１９唑尼沙胺ＥＳＩ－２１０．８－６０５．２７１４７．１－１４ａ定量离子对。８

9犅犑犛２０２２０９附录犆（资料性）标准溶液色谱图标准溶液的总离子流色谱图见图Ｃ．１，提取离子色谱图见图Ｃ．２。标引序号说明：１———阿米洛利；１１———帕罗西汀；２———茶碱；１２———舍曲林；３———纳曲酮；１３———奈法唑酮；４———氨苯蝶啶；１４———螺内酯；５———脱乙酰比沙可啶；１５———双醋酚丁；６———氯苯丁胺；１６———新利司他；７———苯甲吗酮；１７———唑尼沙胺；８———西酞普兰；１８———依他尼酸；９———苯佐卡因；１９———大黄素。１０———托吡酯；图犆．１标准溶液总离子流色谱图（１０．０狀犵／犿犔）图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）９

10犅犑犛２０２２０９图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）（续）０１

11犅犑犛２０２２０９图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）（续）１１

12犅犑犛２０２２０９图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）（续）２１

13犅犑犛２０２２０９图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）（续）３１

14犅犑犛２０２２０９图犆．２各化合物提取离子色谱图（１０．０狀犵／犿犔）（续）本方法负责起草单位：广州质量监督检测研究院、广东省药品检验所。本方法验证单位：北京市食品安全监控和风险评估中心（北京市食品检验所）、河北省食品检验研究院、深圳市计量质量检测研究院、南京市产品质量监督检验院、广州海关技术中心。本方法主要起草人：黄金凤、寻知庆、温家欣、陈杰锋、汪晨霞、何嘉雯、贾亚丽、赖宇红、谢刘静、黄志宁。４１