柏树内生真菌的分离与抑菌研究.doc

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1、摘要植物内生真菌作为生活在植物组织内部的一大类微生物，在其生活史的一定阶段或全过程中队宿主不表现出明显病症。在长期共同进化过程中，植物内生菌与宿主植物之间形成了一种共生关系。香柏和罗森绘具有天然的抗白蚁特性，按照基因可互相传递的原则推测，香柏的内生菌可以产生对白蚁有抑制作用的活性物质。因此本实验旨在从具有天然抗白蚁树木的树枝、树皮中分离出能抗白蚁的内生真菌。利用白蚁体内共生菌作指示菌，采用牛津杯法做抑菌试验，得到抑菌功能效果好的菌株HDF-I-217和HDF-I-232。下一步将对该两株菌进行鉴定，提取其代谢产物用于防治白蚁，这将具有极大的开发利用价值。关键词内生真菌白

2、蚁分离目录摘要11.前言11.1植物内生真菌11.2植物内生真菌研究现状及应用11.3白蚁及白蚁的危害31.4白蚁的防治51.5本实验研究的目的及意义72.材料与方法72.1材料及设备72.2试验方法83．结果与分析103.1柏树木内生真菌的分离104.讨论125．结论136.参考文献147.致谢15附录161.前言1.1植物内生真菌1.1.1内生菌概念对内生菌的定义认识是不断发展的。首先由BeBary提出，内生菌是指生活在植物组织内的微生物，以区分那些生活在植物表面的表生菌（Epiphyte）；后来Carroll将内生菌定义为生活在地上部分、活的植物组织内并不引起明显

3、病害症状的真菌，突出强调内生菌与植物的互惠共生关系，因此，这个内生菌概念不包含植物致病菌和菌根菌[1]。目前，内生菌概念是由Stone等提出的，是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌，被感染的宿主植物（至少暂时）不表现出围在病症，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物DNA的方法来注明其内生[2]。也就是说我们可以把植物内生菌理解为生活于植物组织内的正常菌群，不仅包括互惠共利的内共生微生物，也包括潜伏在宿主植物体内的病原菌[3]。1.1.2植物内生真菌植物内生菌主要有细菌、真菌和放线菌

4、。内生真菌（Endophyticfungi）是指那些在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。近年来的研究表明，内生真菌可以产生与宿主相同或相似的代谢产物。植物与内生真菌呈互利共生的关系：一方面，植物为内生真菌提供光合产物和矿物质；另一方面，内生真菌产生的代谢物，或能刺激植物的生长发育，或能提高宿主植物对生物胁迫或非生物胁迫的抵抗能力。这些代谢物中的一部分，正是应用前景广阔的新型生物活性物质，有很高的开发利用价值[4]。1.2植物内生真菌研究现状及应用内生真菌广泛存在于健康植物组织内部，是植物微生态系统的重要组成部分。内生真菌产生的

5、各种活性物质，在生物制药、农业生产、工业发酵的方面都表现出美好的应用前景，受到世界各国专家的广泛关注。利用内生真菌发酵实现生物活性物质的工业化生产，可以提高产量、降低产品成本，满足人们日益增长的需求；同时又利于珍稀、濒危要用植物资源的保护，对减少野生药用植物多样性的破坏具有重要意义。药用植物具有丰富的物种多样性，是人类生存与发展的重要自然资源。各种药用植物中蕴藏着非常丰富的内生真菌。通过与药用植物的“协同进化”，某些内生真菌具有了产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质的能力。1.2.1抗肿瘤活性物质植物中极低的含量和植物资源的有限是人类规模利用这些化合物所面临的主要困难

6、。这造就了从红豆杉等植物中去寻找能产生紫杉醇的内生真菌。从红豆杉的内生真菌中不仅分离出了紫杉醇，现已从红豆杉及其近缘植物分离到了许多种产紫杉烷类化合物的内生菌。落羽松（Taxodiumdistchum）、榧树（Torreyagrandifolia）、银杏（Ginkgobiloba）、秃柏（Toxodiumdistichum）以及一种松树（Wollemianobilis）中都分离到了能产生紫杉醇的内生菌，这为紫杉醇的来源问题提供了很好的解决办法[5]。以中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）株作为模型，对喜树内生真菌此生代谢产物进行体外抗肿瘤活性试验，结果表明从喜树的树皮和树枝中

7、均分离了能产生抑制CHO细胞增殖活性的内生真菌[6]。郭智勇等[7]从三种红树林内生真菌Paecilomycessp.(treel-7),4557,ZZF65中分到九个环肽类的次级代谢产物，其中得到的环Pro-Leu具有强的抗癌活性及特殊的抗菌活性而被称为灭癌素。1.2．2抗菌活性物质多种药用植物本身具有抗菌消炎作用，因此其内生真菌也是筛选抗病原菌菌株的理想途径，已有多种药用植物内生真菌被研究过抑菌活性。从黄花夹竹桃分离到的内生真菌中有17株具有抑菌活性，其中一株木霉（Trichodermsp.）抑菌活性最强，抗菌谱最广[1]。Wagen