蝉蜕、僵蚕治疗系膜增生性肾炎模型大鼠对肾组织iNOS、ET表达的影响.pdf

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1、中国中西医结合肾病杂志2014年5月第l5卷第5期CJITWN．May2014，V01．15。No．5·429·蝉蜕、僵蚕治疗系膜增生性肾炎模型大鼠对肾组织iNOS、ET表达的影响杜雅静①汪慧惠②于英兰①于俊生①[摘要]目的：观察蝉蜕、僵蚕治疗系膜增生性肾炎模型大鼠的效果，及其对诱导型一氧化氮合酶、内皮素一1表达的影响。方法：选用清洁级Wistar大鼠60只，随机分组，采用改良慢性血清病法复制MsPGN模型，各治疗组大鼠分别给予蝉蜕、僵蚕不同剂量颗粒冲剂干预。检测各组大鼠24h尿蛋白定量。HE染色观察各组肾组织的病理变化；免疫组化法观察各组大鼠肾脏

2、组织中诱导型一氧化氮合酶、内皮素一1的表达情况。结果：治疗组大鼠尿蛋白明显减少。肾脏病理改变较轻，肾脏组织中诱导型一氧化氮合酶、内皮素一1的表达较弱。结论：蝉蜕、僵蚕能减少蛋白尿，抑制肾小球系膜细胞的增殖，减轻系膜基质积聚。其作用机制可能与抑制肾脏组织中诱导型一氧化氮合酶、内皮素一1的过度表达有关。[关键词)系膜增生性肾炎蝉蜕僵蚕一氧化氮合酶(iNOS)内皮素(ET)在我国系膜增生性肾炎(MsPGN)是一种非常常见的原发2．2实验分组及给药方法造模第5周末，应用考马斯性肾小球疾病。目前临床上应用蝉蜕、僵蚕等虫类药治疗慢性亮蓝法测定各组大鼠24h尿蛋

3、白定量，剔除尿蛋白阴性大鼠肾炎取得较好疗效，但单味药治疗效果及作用机制的研究较少2只，尿蛋白阳性的48只大鼠随机分为模型组1O只、蝉蜕低剂见，本文观察蝉蜕、僵蚕对MsPGN模型大鼠的治疗作用及对大量组9只、蝉蜕高剂量组10只、僵蚕低剂量组9只、僵蚕高剂鼠肾组织诱导型一氧化氮合酶、内皮素一1表达的影响，探讨量组10只。造模第6周，采用直接灌胃方法，给予大鼠药物干其作用机制。预处理，每日灌胃1次，干预时间为8周。按照临床患者用药标准分为高、低两个剂量(30g、15g)，取大鼠用药量为人的材料与方法7倍换算J，高、低剂量生药含量分别为3．5g·kg～·d

4、～、1实验材料1．75g·kg～·d～。蝉蜕高、低剂量组大鼠予蝉蜕颗粒冲剂1．1实验动物选用清洁级Wistar大鼠60只，6—8周2ml灌胃，僵蚕高、低剂量组大鼠予僵蚕颗粒冲剂2ml灌胃，龄，体重(200±20)g，青岛市药品检验所提供，实验动物使用许正常对照组和模型组给予自来水2ml灌胃。实验给药期间，可证号：SLXK<鲁>20090002。模型对照组，蝉蜕高剂量组、僵蚕低剂量组相继共有3只大鼠1．2实验药品蝉蜕、僵蚕颗粒制剂，由华润三九医药股意外死亡。份有限公司提供。2．3检测指标1．3主要试剂及仪器完全弗氏佐剂，Sigma公司；牛血2．3．1

5、24h尿蛋白定量分别在实验大鼠造模后的第清白蛋白(BSA)，罗氏公司；一抗为兔抗鼠TGF—B。单克隆抗5周末、给药后的第5周末、第8周末，留取24h尿标本，测定体，Sigma公司；二抗山羊抗兔IgG、DAB显色试剂盒、SABC免24h尿蛋白定量。疫组化染色试剂盒、武汉博士德生物工程有限公司；尿蛋白测2．3．2组织病理取左侧肾脏组织，4％多聚甲醛固定，定试剂盒，北京利德曼生化技术有限公司；血生化测定试剂，宁制备组织切片。行苏木素一伊红染色；免疫组织化学(SABC波瑞源生物科技有限公司；日立7600全自动生化分析仪，法)观察各组大鼠肾组织中iNOS、E

6、T一1的表达。Olympus(日本)；图像分析系统，ImageProPlus一6．0彩色图像光学显微镜下，细胞膜和细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗分析软件。粒为阳性表达。在×400高倍镜视野下分别观察肾脏组织中2试验方法iNOS、ET一1的表达情况，并用照相机将每张切片随机拍摄2．1动物模型的制备60只Wistar大鼠适应性喂养5张图片，采用图像分析软件Image—ProPlus6．0对视野中的1周，随机选取10只为正常对照组，剩余5O只采用改良慢性血棕黄色或棕褐色区域进行定量分析，各组iNOS、ET一1的表达清病法复制MsPGN模型0：10％水合氯醛

7、(3ml／kg)腹腔注水平用平均光密度值表示。射麻醉，切除右侧肾脏。正常对照组行假手术。术后1周行预3统计学方法计量资料以(±s)表示，采用SPSS17．0免疫：大鼠背部皮下分点注射完全弗氏佐剂0．1ml加3mg进行数据统计，组间比较用方差分析，以P<0．05表示差异有BSA，于1周末、2周末加强两次。3周末，腹腔连续4次注射统计学意义。BSA，间隔时间为1h，注射剂量分别为每只0．5mg、1．0mg、结果1．5mg、3．0mg；次日晨加强1次(2．0mg／只)。预免疫之后每日腹腔注射BSA，剂量从每只0．5mg开始，每日增加0．5—1蝉蜕、僵蚕对

8、MsPGN模型大鼠24h尿蛋白的影响造5．0mg，继续每周加量1—10mg为止。在正常对照组大鼠预模第5周末，测定各组大鼠