马动脉炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第8期中国预防兽医学报Vo1．36．No．82014年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．08．16马动脉炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立胡月1,2，戚亭，赵世华，关平原，王晓钧(1．内蒙古农业大学兽医学院／农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特010018；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／马传染病与慢病毒创新团队，黑龙江哈尔滨1500

2、01)摘要：为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法，本实验以EAVN蛋白单克隆抗体(MAb)2B9为捕获抗体，辣根过氧化物酶(HI)标记的EAVN蛋白MAb2B3(HRP．2B3)为检测抗体，建立EAV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示，该方法的最佳工作条件为：MAb2B9的包被浓度为2~g／mL，HRP一2B3的工作浓度为2~g／mL，以OD45onm0．124为阳性判定标准。该方法对马传染性贫血病毒、马疱疹病毒I型和IV型、马流感病毒等均无交叉反应，特异性好；最低检出限为病毒标准品200倍稀释(1OTCID。)，敏感性

3、高。3次重复试验建立的标准曲线的相关系数(R21均大于0．997。本实验建立的EAV双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、敏感性高等优点，适于EAV的快速检测。关键词：马动脉炎病毒；双抗体夹心ELISA；单克隆抗体；检测中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)08．0651-04DevelopmentofadoubleantibodysandwichELISAfordetectionofequinearteritisvirusHuYue，一，QITing2，zHA0Shi-hua，GuANP

4、ing-yuan，NGXiao-jun(1．KeyLaboratoryofClinicalDiagnosisandTreatmentTechnologyinAnimalDisease，MinistryofAgriculture，CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMongoliaAgricultrualUniversity，Hohhot010018，China；2．DivisionofLivestockInfectionsDisease，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBi

5、otechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：TodevelopamethodforEAVdetection，adouble—antibodysandwichELISA(DAS—ELISA)wasdevelopedusingMAb2B9againstEAVnucleoproteinascaptureantibodyandMAb2B3conjugatedtoH

6、RP(HRP一2B3)asdetectingantibodyundertheoptimizedreactionconditionsofcoatingwithMAb2B9at2ixg／well，detectingwithHRP一2B3at2~g／wellwithacutoffvalueof0．124(OD45m．ThespecificitytestshowntheDAS·ELISAwasspecificallydetectedEAVwithadetectionlimitof10。TCID5o，butnocrossing—reacti

7、ontoequineherpesvirusI，equineherpesvirusIV，equineinfluenzavirusandequineinfectiousanemiavirus．Inaddition，thestandardcHIveofEAVquantificationbytheDAS—ELISAhadlinearcorrelationwiththreetimesrepeatedtestsandtheRwereabove0．997．TheseresultsdemonstratedthattheDAS—ELISAmetho

8、dwasspecificandsensitive．whichhadapotentialtobeapplicablefortheEAVdetectioninhorse．Keywords：equinearteritisvirus；double—anti