微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备.pdf

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1、华南理工大学学报（自然科学版）第29卷第6期JournalofSouthChinaUniversityofTechnologyVol.29No.62001年6月（NaturalScienceEdition）June2001"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""文章编号：1000-565X（2001）06-0056-04微球形固定化!-葡萄糖苷酶的制备彭志英岳振峰张学兵徐建祥赵谋明（华南理工大学生物科学与工程研究

2、中心，广东广州510640）摘要：将粉末状壳聚糖制备成微球形多孔载体，采用吸附-交联的方法将TGL固定化.研究表明，制备微球形多孔壳聚糖载体的关键取决于壳聚糖原料的分子量分布、壳聚糖的稀酸溶液浓度以及凝结液的组成等因素；当壳聚糖的相对分子质量为3.0>105左右，壳聚糖溶液浓度为2.5%，凝结液组成为2mOI/LNaOH140%甲醛=312（体积比）或2mOI/LNaOH1甲醇=31（1体积比）时，可制得微球形多孔壳聚糖载体.最佳固定化条件研究表明，对于脱乙酰度为88%的壳聚糖载体，加酶量为3>1

3、05Unit/g时，在pH6.0条件下，室温吸附81，然后用2.0%的戊二醛在45C交联91，可得到固定化酶的活力为2.342>105Unit/g，酶活力回收率为78.1%，并具有较好的强度.关键词：!-葡萄糖苷酶（EC3.2.1.20）；固定化；壳聚糖；微球形中图分类号：O556文献标识码：A!-葡萄糖苷酶（!-glucosidase，EC3.2.1.20）又下简称TGL）：日本天野制药株式会社产品，酶活力叫!-D-葡萄糖苷水解酶，它可以从低聚麦芽糖的83.0>10Unit/L；壳聚糖：广州凯利

4、生物制剂制品厂非还原末端切开!-1，4糖苷键，释放出葡萄糖，或产品，脱乙酰度（80%，88%，95%），粘度100~250将游离出的葡萄糖残基转移到另一底物形成!-1，mpa·s；其他试剂均为分析纯试剂.6糖苷键，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖，是工1.2方法业化生产低聚异麦芽糖的关键酶制剂［1］.低聚异麦1.2.1微球形多孔壳聚糖固定化载体的制备芽糖由于具有双歧杆菌增殖因子和抗龋因子的双重粉末或片状壳聚糖!稀醋酸或盐酸溶解!用注功能，而成为重要的保健食品基料，且产销量增长迅射器滴入凝结液中制成球

5、形颗粒!蒸馏水洗至中性速.但!-葡萄糖苷酶价格较为昂贵，在一定程度上!丙酮洗涤脱水!50C真空干燥!球形多孔壳聚阻碍了低聚异麦芽糖的发展和应用.固定化酶法生糖载体.产低聚异麦芽糖无疑是降低其生产成本的有效途径1.2.2微球形ITGL的制备之一.本研究将壳聚糖制备成具有良好使用性能的球形多孔壳聚糖载体!预处理!在pH6.0的微球形多孔固定化载体，再将其用来固定!-葡萄缓冲液中加入一定量的TGL室温下吸附!用戊二糖苷酶，取得了较好的效果.醛交联!静置、离心、弃去上清液!水洗至洗液无酶蛋白检出!微球形I

6、TGL!pH5.0缓冲液中4C下1材料与方法贮存备用1.2.3酶活力的测定1.1材料游离酶活力的测定按文献［2，3］进行，酶活力!-葡萄糖苷酶（TransglucosidaseL“Amano”，以单位定义为40C下TGL作用于甲基-!-!-葡萄收稿日期：2000-10-13修订日期：2001-01-10糖苷每小时生成1"g葡萄糖的酶量为1个活力单作者简介：彭志英（1934-），男，教授，博士生导师，主要从位（记为Unit）.固定化酶活力的测定方法基本与游事食品生物技术研究.离酶相同，只是反应过程中

7、始终保持搅拌.文中游离第6期彭志英等：微球形固定化"_葡萄糖苷酶的制备57酶的活力单位以Unit/L表示，固定化酶的活力单位表2凝结液组成对壳聚糖微球制备的影响以Unit/g表示，文中涉及质量单位的均指干重.Table2Effectofcompositionofcoagulantsolutiononl.2.4蛋白质浓度的测定preparationofmicrosphericalcarrier［4］序形成壳聚糖采用考马斯亮蓝G-250法.凝结液组成号微球的性质#NaOH（40%）:甲醇（60%）:l

8、:（l体积比）强度高，实心结构l2结果与讨论#NaOH（40%）:甲醛（40%）:l:（l体积比）强度高，多孔结构2#NaOH（2mol/L）:甲醛（40%）:3:（2体积比）强度较高，多孔结构3#NaOH（2mol/L）:甲醇（l00%）:3:（l体积比）强度较高，多孔结构2.l制备壳聚糖微球的影响因素42.l.l相对分子质量据文献报道［5］，适合制备微球的壳聚糖相对分子质量为2.0>l05~4.0>l05.壳聚糖分子量过大，制成溶液粘度大，用针形注射器或酸式滴定管均无法将壳聚糖