实验二 牛奶中酪蛋白和乳糖的分离.doc

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1、实验二　牛奶中酪蛋白和乳糖的分离1、实验目的（1）熟悉蛋白质通过等电点沉淀进行分离的原理。（2）熟悉蛋白质和乳糖分离纯化的操作。2、实验原理牛奶是营养最完备的食品之一，牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质。牛奶中蛋白质主要是酪蛋白，其浓度大概为35g/L，约占牛奶含量的3.4%，实际上酪蛋白是含磷蛋白的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋白钙。利用蛋白质在等电点时溶解度最小的特性，把牛奶的pH值调到酪蛋白的等电点（pH=4.8）来沉淀分离酪蛋白，酪蛋白不溶于乙醇，所以用乙醇将其中的脂肪洗涤除去。牛奶中的糖主要是乳糖，也是唯一由哺乳动物合成的糖，乳糖

2、是成长中婴儿建立其发育中的脑和神经组织所需的物质。乳糖不溶于乙醇，在乙醇水溶液中会结晶出来，从而达到分离的目的。3、实验仪器与试剂烧杯（250mL×2）、水浴锅、电炉、真空泵、布氏漏斗、锥形瓶（250mL）、培养皿、量筒、精密pH试纸、白纱布、玻璃棒、滤纸、碳酸钙、95%乙醇、新鲜牛奶。（1）10%乙酸溶液。（2）25%乙醇溶液。4、实验操作　　（1）酪蛋白的分离取50mL新鲜牛奶置于250mL烧杯中，在水浴锅中加热至40℃，在搅拌下慢慢加入10%乙酸溶液，使混合物溶液的pH值为4.8，用四层纱布覆盖在另一烧杯口，过滤，再用少量水洗涤沉淀2-3次（在滤液中立即加入

3、5g碳酸钙，并搅拌几分钟，留作下一步实验用）。把沉淀转移至烧杯中，加入30mL95%的乙醇，搅拌后用布氏漏斗过滤，再用95%乙醇30mL洗涤酪蛋白沉淀2次，每次用搅拌棒搅拌在乙醇中的酪蛋白约10min，并捣碎任何团块。用布氏漏斗过滤后把固体转移至培养皿上，让乙醇挥发掉，称重得酪蛋白。（2）乳糖的分离把上个实验中的滤液在电炉上加热，使其平衡沸腾约10min，将热的混合物用布氏漏斗过滤，除去沉淀的蛋白质和残余的碳酸钙。把滤液转移至烧杯中并将滤液浓缩至约30mL，在热的溶液中加入95%乙醇45mL，并继续加热，待其混合均匀后，趁热过滤，滤液应澄清，把滤液移至锥形瓶中，加

4、塞，放置1-2天，让乳糖充分结晶，减压过滤，分离出乳糖晶体，并用冷的95%乙醇水溶液洗涤产物，待其干燥后稳重。5、数据处理　　记录分离得到的酪蛋白和乳糖的质量，计算收得率。1