纳豆芽孢杆菌B4对Caco-2细胞活性、黏附与细胞因子分泌的影响-论文.pdf

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1、动物营养学报2014，26(1)：279—286ChineseJournalofAnimalNutritiondoi：10．3969／j．issn．1006-267x．2014．01．036纳豆芽孢杆菌B4对Caco一2细胞活性、黏附与细胞因子分泌的影响尚沁沁黄琴徐歆史艳云李卫芬余东游(浙江大学动物科学学院饲料科学研究所，农业部华东动物营养与饲料重点实验室，杭州310058)摘要：本试验以Caco-2细胞为体外模型研究纳豆芽孢杆菌B4对其活性、黏附与细胞因子分泌的影响。采用台盼蓝排斥试验和乳酸脱氢酶细胞毒性检测研究纳豆芽孢杆菌B4对Caco．2细胞活性的影响；

2、采用荧光标记法评价大肠杆菌K88和霍乱沙门氏菌的黏附性能，并通过竞争、排斥和置换试验检测纳豆芽孢杆菌B4对这2株病原茵黏附的阻断作用；采用酶联免疫试剂盒测定Caco一2细胞分泌的细胞因子含量。结果表明：1)纳豆芽孢杆菌B4对Caco-2细胞存活率无显著影响(P>0．05)，且对其无毒害作用。2)纳豆芽孢杆菌B4对大肠杆菌K88和霍乱沙门氏菌黏附Caco．2细胞的黏附率无显著影响(P>0．05)，且对这2株病原茵黏附Caco．2细胞无阻断作用。3)纳豆芽孢杆菌B4极显著提高了Caco-2细胞分泌促炎细胞因子增殖诱导配体含量(P<0．O1)，对白细胞介素一6和白细

3、胞介素一8含量无显著影响(P>0．05)，极显著降低了Caco一2细胞分泌抗炎细胞因子白细胞介素一l0含量(P<0．01)。综上所述，纳豆芽孢杆茵B4对Caco-2细胞无毒性，对大肠杆菌K88和霍乱沙门氏菌黏附Caco-2细胞无阻断作用，可通过调节Caco-2细胞的细胞因子分泌发挥一定的免疫功能。关键词：纳豆芽孢杆菌；Caco．2细胞；细胞活力；黏附；细胞因子中图分类号：$816文献标识码：A文章编号：1006—267X(2014)01-0279-08益生菌是指对人畜有益的活体微生物。外等功能E6-7]。研究表明，在饲粮中添加纳豆芽孢杆源性益生菌进入肠道后，通

4、过促进机体肠道微生菌B4可提高肉鸡的平均13采食量和平均日增态平衡、增强机体免疫力、维持养殖生态平衡，最重J，促进仔猪肠道乳酸菌定植_9J，提高鱼的非特终达到促生长和提高抗病力等益生作用，并具有异性免疫叫等。目前，关于益生菌对机体免疫影无毒性、无残留、无耐药性以及无环境污染等优响的研究多集中于乳酸菌，而针对纳豆芽孢杆菌点J。益生菌主要通过免疫调节(增强肠道免疫、的研究较少。因此，有必要系统、深入地研究饲用活化全身免疫系统及减轻炎症反应)和非免疫纳豆芽孢杆菌的作用机理，特别是其提高动物免调节(改善肠道微生态平衡和肠道形态结构)2疫功能的机理。本试验拟研究纳豆芽孢

5、杆菌B4种途径改善动物肠道健康，从而促进动物生长。对Caco-2细胞活性、黏附与细胞因子分泌的影响，纳豆芽孢杆菌(Bacillussubtilisvar．natto)B4是枯旨在探索该菌株对肠黏膜免疫功能的调控机理，草芽孢杆菌的一个亚种J，可分解大分子物质如从而为纳豆芽孢杆菌在畜牧生产中的应用提供科蛋白质、碳水化合物、脂肪等，促进营养物质的消学依据。化吸收，同时具有抗癌、抗菌、抗氧化、降低胆固醇收稿Et期：2013—07—15基金项目：东南沿海地区大学农业科技服务技术集成与示范项目(2013BAD20B00)；杭州市科技局农业科研攻关专项(20120232B2

6、6)；国家863资金资助项目(2013AA102800)作者简介：尚沁沁(1989一)，女，河南焦作人，硕士研究生，动物营养与饲料科学专业。E-mail：21217020@zju．edu．cn通讯作者：余东游，教授，硕士生导师，E—mail：dyyu@zju．edu．cn280动物营养学报K88和霍乱沙门氏菌分别经LB培养基、麦康凯琼1材料与方法脂培养基和ss琼脂培养基活化后，接种于LB液1．1试验材料体培养基，37oc，200r／min摇床培养至对数生长纳豆芽孢杆菌B4菌株由浙江大学饲料科学期，4000r／min离心10min，收集菌体，用无菌磷研究所农业部

7、华东动物营养与饲料重点实验室提酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)洗涤2次，最后重悬于供；大肠杆菌(Escherichiacoli)K88和霍乱沙门氏含10％FBS的DMEM培养基中，调节细菌的浓菌(Salmonellacholeraesuis)均购自国家兽医微生度为2X10。CFU／mL。物菌种保藏管理中心；Caco．2细胞购自中国科学1．3．2细胞活性检测¨院上海生命科学研究院细胞资源中心。Caco-2细胞以1X10。个／mL接种于细胞培养1．2主要试剂和设备板，37oC，5％CO培养箱中培养12h使细胞重新Luria—Bertani(LB)培养基(英国Oxo

8、id公贴壁，试验组分别加入纳豆芽孢杆菌