细菌分解葡萄糖-乳糖产酸产气使斜面与底层均呈黄色(酚红.doc

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1、课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验十二大肠埃希菌、产气杆菌检验一、实验目的1.掌握E.coli、产气杆菌的分离培养与鉴定方法；2.掌握E.coli、产气杆菌的形态、染色特性、培养特性、生化反应及鉴定依据。二、实验器材与试剂 1.菌种：普通E.coli、产气杆菌 2.培养基：SS,中国兰,KIA,MIU,蛋白胨,葡萄糖蛋白胨水,枸橼酸盐琼脂斜面,硝酸盐culturemedia3.试剂：20%尿素，0.4%酚红水溶液，1%中国兰水溶液，20%乳糖水溶液 1%玫瑰红酸酒精液，1%溴麝香草酚兰酒精溶液 靛基质试剂甲基红试剂VP试剂（40%KOH肌酸溶液），氧化酶试剂与

2、纸片，3%过氧化氢，4.革兰染液，擦镜纸，电吹风，显微镜，恒温箱三、实验内容㈠标本的采集： 肠道细菌感染可采集粪便，肠道外感染可根据临床感染情况采集中断尿液，血液，脓汁，胆汁，脑脊液，痰，分泌物，水等。 ㈡检验程序 E.coli、产气杆菌 接种 SS，中国兰，KIA，MIU，蛋白胨水，葡萄糖蛋白胨水，枸橼酸盐琼脂斜面，硝酸盐culturemedia 37℃，24h 观察分析结果吲哚试验VP试验甲基红试验GS9报告结果 ㈢培养基的制备（Productingculturemedia）:1.SSculturemedia(Samonella-Shigella培养基)（重点）⑴成分：①营养物：示

3、胨，蛋白质，牛肉膏②抑制物：煌绿，胆盐，硫代硫酸钠，枸橼酸钠（抑制非病原菌生长）③促进剂：胆（碱）盐（促进病原菌生长）④鉴别用糖：乳糖⑤指示剂：中性红（酸红碱黄）⑵原理： 能利用乳糖的细菌产酸使指示剂变红色；枸橼酸铁能使产H2s的菌落中心呈黑色；硫代硫酸钠有缓和胆盐对痢疾杆菌，沙门菌的有害作用，并能中和煌绿和中性红的毒性 ⑶用途： 是一种强选择culturemedia，用来分离肠道致病菌用（附：现在Ssagar一般使用成品，只要按一定的量加入蒸馏水即可，无需调PH值，无需灭菌） ⒉中国兰culturemedia：弱选择culturemedia⑴成分： 普通ager100ml 乳糖（20

4、%水溶液）1g（5ml）1%中国兰水溶液2ml 1%玫瑰红酸乙醇液1ml配好后culturemedia呈淡红色⑵原理： 玫瑰红酸能抑制G+菌的生长。因其是酒精配制无需灭菌，但加时应避免开火焰。能分解乳糖的细菌产糖，菌落呈蓝色，不分解乳糖细菌呈淡紫红色。 中国兰与玫瑰红酸的变色范围如下： 指示剂酸性碱性 9中国红蓝色微蓝至无 玫瑰红酸黄色红色 ⑶用途：分离肠道致病菌用⒊KIAculturemedia（双糖铁培养基）（重点、难点）⑴成分： 蛋白胨FeSO4NaCl硫代硫酸钠 葡萄糖（1g）agar乳糖（10g）0.4%酚红牛肉膏，水 （附：现一般使用成品，0.7kg15min高压灭菌。制成

5、斜面培养基）⑵原理： ①葡萄糖，乳糖的分解： 细菌分解葡萄糖，乳糖产酸产气使斜面与底层钧成黄色（酚红指示剂变色范围：酸黄碱红），具有气泡。若细菌分解葡萄糖而不分解乳糖，分解乳糖产酸使culturemedia的PH下降，因此斜面和底面均成黄色，但葡萄糖含量较少，（葡萄糖：乳糖=1：10）所产生的酸可因接触空气而氧化，并因细菌生长繁殖利用含氧物质生成碱性化合物使斜面部分又变成红色，底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所生成的酸一时不被氧化而保持黄色。②细菌产H2S可与culturemedia内的FeSO4作用形成黑色的沉淀。③硫代硫酸钠是防止FeSO4被氧化。(3)用途:鉴别肠道杆菌用⒋M

6、IUculturemedia(动力-靛基质-尿素酶培养基)(1)成分(实验指导160页)蛋白胨10gagar2g水1000mlNacl5gKH2PO42g葡萄糖1g20%尿素100ml0.4%酚红水溶液2ml调PH为7.068.95kpa高压灭菌15分钟,尿素与酚红高压灭菌后加入(2)原理 此9培养基制成半固体,可观察细菌的动力,蛋白胨中有色氨酸,可做靛基质试验(原理后述),产生尿素酶的细菌将培养基中的尿素分解产氨,使酚红指示剂显红色。 ⑶用途 同时可观察细菌动力,靛基质的产生,细菌分解尿素的活性⒌硝酸盐culturemedia ⑴成分 蛋白胨:1克硝酸钾:0.1克 水:100mlPH

7、:7.4-7.6⑵原理：有些细菌还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐可与醋酸作用生成亚硝酸，再与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与α-萘胺结合，生成红色的N-α萘胺偶氮苯磺酸⑶用途:硝酸盐还原试验用⒍蛋白胨水培养基⑴成分蛋白胨(胰蛋白胨)20克Nacl5g蒸馏水1000ml调PH至7.4⑵原理细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质和对位二甲基氨基苯甲醛,后有玫瑰红化合物生成(3)用途：靛基质试验用(indole)⒎枸橼酸盐culturemed