心脏手术中心肌组织高能磷酸化合物的高效液相色谱测定.pdf

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1、心脏手术中心肌组织高能磷酸化合物的高效液相色谱测定及比较研究刘智敏东云华寇瑛莉（华西医科大学分析测试中心成都610044）1前言254nm；灵敏度：0.01AUFS；进样量：20L。心肌保护是心脏外科的一个重要研究领域，而2.3样品制备手术前后心肌组织高能磷酸化合物—腺嘌吟核苷分别取心脏病人手术前后50mg心肌组织，加三磷酸（ATP，腺嘌吟核苷二磷酸（ADP和腺嘌吟入0.42mol/L高氯酸1mL，匀浆，在4℃以3000r/核苷一磷酸（AMP）含量的变化程度是判断手术过min离心5min，取上清液200L，加入1mol/L氢氧程中心肌保护的一个重要指标[1]。本文采用快速、灵化钾调p

2、H为6.25，再在4℃下，以3000r/min离心敏、重现性好的反相高效液相色谱法[，갳]，对心脏手5min，取上清液进样。术过程中传统的冷晶体停跳液（CCC）间断灌注、改3结果与讨论进的含氧浅低温血停跳液（CBC）持续灌注和含氧常温血停跳液（WBC）持续灌注三种灌注法手术前后3.1方法性能心肌组织ATP、ADP和AMP的含量进行测定，以3.1.1线性范围按外标法定量，ATP、ADP、比较三种灌注方法对心肌的保护程度。AMP在03010-mol/L浓度范围内，峰面积对浓度均有良好的线性关系（n=7，它们的线性方程2实验部分和相关系数分别为：Y=-7385.72+104057.43Xγ

3、2.1仪器试剂=0.9998Y=11003.57+99293X=0.9997=仪器瑞典LKB公司高效液相色谱仪，包括：36375+98063=0.9996。2150输液泵，2152控制器，2220数据处理机，配美3.1.2重复性将110-mol/LATP、0.85×国PE公司LC-295多波长紫外检测器。10-mol/LADP和110-12mol/LAMP的混合标试剂ATP、ADP、AMP等标准对照品（Sigma准液重复进样5次，所得峰面积的变异系数分别为公司）；高氯酸、氢氧化钾、氢氧化铵、磷酸二氢铵均1.7%1.4%和0.99。为市售国产分析纯级；实验所用水为双蒸水。3.1.3回收

4、率分别按每克湿组织.5mol的量2.2色谱条件加入ATPADPꉁAMP到50mg心肌组织中，按样品色谱柱：LichrosorbRP185m，250mm4mm制备方法处理，进行加标回收试验，分析结果及回收i.d.；柱温2728流动相：pH6.25，0.1mol/L率如表1。磷酸铵缓冲液；流速：0.8mL/min紫外检测波长：表1回收率（％）试验本文收稿日期：1994年8月19日，修回日期：1995年1月28日3.2对三种灌注法手术前后心肌组织ATPADP、有利于手术后心肌组织功能的尽快恢复，可望在临AMP的测定及比较床上推广。图1是心肌组织ATPADP、AMP的高效液相色谱图，从中可以

5、看出三组分之间分离效果较好，其保留时间分别为5.48，6.4810.77min。通过将38例病人分为CCC组（组）CBC组（组）及WBC组（组）进行试验，测得结果如表2。由表2数据可以看出，手术前后各组间三组分的含量均无显著性差异（P0.05곊手术后ATP的含量均有明显减少（P0.05ADP和AMP的含量无明显减少或增加（P0.05。但在能量储备EC值上，手术后CBC组和WBC组无明显减少（P＞0.05겶而CCC组明显减少（P0.05，说明手术后改进的CBC持续灌注法和WBC持续灌注法较传统的CCC间断灌注法心肌组织还储备了足够的能量，表2各组心肌中ATP、ADP、AMP含比较关键词

6、高效液相色谱法，高能磷酸化合物，心肌组1BigelowWGetal.AmJPhysiol,1950160:125织，冷晶体停跳液，低温血停跳液，含氧常温2Hull-RydeEAetal.JChromatogr,1986;377:165血停跳液3HollissDGetal.AnalyticalLetters,1984;17(B18):2047参考文献（下转第299页）基本相同的色谱条件下，测定合成戊二醛的原料、中参考文献间产物和终产物，方法简便，定量快速、准确，为丙烯1李天全．化学试剂，1988105303醛-乙烯基乙醚法合成戊二醛工业化生产提供了方2詹益兴．实用气相色谱分析．长沙：湖

7、南科学技术出版便实用的控制分析方法。社，19831953LynmanGW,JohnsonRN,KhoBT.JChromatogr,关键词气相色谱法，戊二醛，丙烯醛2-乙氧基-34-1978;56:285二氢-2H-吡喃，乙烯基乙醚GasChromatographicAnalysisintheSynthesisofGlutaraldehydebyAcrolein-VinylEtherMethodCuiQingxin,YinBaolinandZhangLiyu