全基因组扩增技术的研究进展

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1、维普资讯http://www.cqvip.com国外医学遗传学分册2002年第25卷第4期·189·全基因组扩增技术的研究进展金帆袁淑慧黄荷风综述(浙江大学医学院附属妇产科医院．浙江杭州310006)摘要：全基因组扩增可增加微量DNA分析的遗传信息量，为实现微量DNA多基因位点分析和重复检测提供了可能．目前已应用于植入前遗传学诊断、母体外周血胎儿细胞产前遗传学分析．及肿瘤基因分析等领域研究．是一项非常有价值的技术。关键词：全基因组扩增；植入前遗传学诊断；多基因多位，最中图分类号：Q78l文献标识码：A文章编号：1001—1048(2002)04—0

2、189～04植入前遗传学诊断(preimplantationgenetic基因以及全基因组DNA组成的研究。因此．WGAdiagnosis．PGD)j、母体血胎儿细胞遗传学分是一项非常有价值的技术，本文对其作一简述。析、组织显微切割分子生物学分析]、法医学和1WGA技术简介和应用古生物学研究等都会面对一个共同J司题：极有限甚至单拷贝的基因组DNA．与满足多种遗传学分WGA技术发展至今主要的有连接一适应子析要求的矛盾。PCR(1inker—adaptor—PCR)、AluPCR、标记随机引聚合酶链反应(polymerasechainreaction，

3、物PCR(taggedrandomprimerPCR．T—PCR)、扩PCR)具有极高的DNA检测敏感性，多重PCR或增前引物延伸(primerextensionpreamplification，荧光多重PCR已成功应用于极微量和单拷贝的PEP)和简并寡核苷酸引物PCR(degenerateDNA的多位点分析]。但多重PCR存在系统条件oligonuclcotideprimer—PCR，D()P—PCR)。优化困难．多对引物延伸时相互影响，产物分析时1．1连接一适应子一PCR信号相互干扰等困难，使其实际诊断位点数受限。整个基因组DNA经限制性内切酶

4、(MboJ、多色荧光原位杂交(muhicolourfluorescenceMseI等)作用产生数百个碱基大小的DNA片段．in—situhybridization，M—FISH)运用不同比例的荧klenow修饰两末端后．各连接互补的特异性的2o光素组合，可实现对多条染色体的同步分析，但由个碱基对DNA片段．并以此作为PCR反应起始模于具可分辨光谱的荧光染料种类有限，目前多限于板，连接子序列同时作为引物参加扩增。有人认为五色FISH。而多轮FISH因多次洗脱过程．常导致两侧连接子序列完全互补易形成自身互补，会影响细胞核丢失，较常用仅为二轮FISH]。

5、“光谱核PCR效率，因此在一侧的连接子序列的3端删除3型”(spectrumkaryotyping)Ig分析的前提条件是受个碱基对，同时以长连接子序列为引物进行PCR检组织细胞的染色体标本制备，应用于植入前胚反应．扩增效率可增加1OO倍，且不受产物长短的胎、母血胎儿细胞、显微切割、法医学和古生物学研影响。该法扩增除酶切位点间长度有偏差外，序列究异常困难。因此，常用的PCR和FTSH仅能提供选择性偏移较少发生，但其扩增前操作繁琐，在单极有限的DNA片段或染色体区域的遗传信息，难细胞分析时可能丢失部分基因组DNA．实际应用以满足同时检测多位点、多基因、

6、重复检验以及全具有局限性_】。]。基因组的研究需要。1．2Alu—PCR全基因组扩增(wholegenomeamplification，Alu序列是一类人类特有的．在基因组DNAWGA)_1技术通过对微量组织，甚至单个细胞的整广泛分布．并高度保守的间隔重复序列．在人单倍个基因组DNA扩增I1d2]．再将其扩增产物分为多体基因组中约有900000个拷贝．平均间隔4kb，部份．作为模板，进行后续分析，进而完成多位点、多分为染色体G带富集区域。合成Alu—PCR引物收稿日期。2001—09一l2(TC一65，278等)．可扩增跨越两Alu序列区间作者简介

7、：金帆(1958一)．男．主任医师、硕士DNA。A1u—PCR主要用于从杂合细胞或YAC克隆资金项目：浙江省自然科学基金资助项I71【300467)中选择性扩增人染色体DNA。扩增产物可用于制维普资讯http://www.cqvip.com·190·国外医学遗传学分册2002年第25卷第4期备染色体或特异区域的FISH涂色探针、克隆新的冰冻组织细胞，而甲醛固定石蜡包埋组织至少需30标记等。由于Alu序列在人类基因组中分布不均。个细胞j。重复次数不等．该方法获得的DNA有明显的扩增1．5简单寡核苷酸引物PCR(D()P—PCR)不均匀性．不同区域扩增

8、率差异极大。DOP—PCR原理与T—PCR类似．均采用部分随1．3标记随机引物PCR(T—PCR)机引物二步法PCR反应，