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时间:2020-04-11
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1、本章重点:放射自显影的定义放射自显影的基本类型和基本方法放射自显影的感光材料一概述1、定义:放射自显影:利用射线使感光材料感光形成潜影,经显影定影后形成图像;判断放射性示踪剂的分布部位和数量(半定量)的技术。2、放射自显影的发展1867年:铀盐可以使银离子感光;1924年Lacassagne应用于研究钚在生物标本中的分布1946年,Belanger和Leblond首次建立现代放射自显影的方法。3、放射自显影的优点1)灵敏度高。2)定位准确,能把定位和定量结合分析3)感光材料具有累积成像的效应,所需的放射性物质可极微量。4)操作简单易行,不需要复杂昂贵的设备。5)形态、机能和代谢的综合分析6
2、)结果可以长期保存局限性:1、实验周期长。2、定量不准确,只能半定量。4、应用举例药物、营养物质、毒物等在器官、组织、细胞中的分布、运转研究特异性标记前体的参入部位、特点、影响因素标记抗体或药物在离体标本上进行抗原研究或受体的定位示踪二放射自显影的原理(一)潜影形成的原理:和普通光学摄影原理相同;利用射线使感光材料感光在标本中放射性存在的原位置出现银颗粒的沉积。1、电离:释放电子感光乳胶中每颗溴化银结晶由许多AgBr分子组成。制造乳胶时,都使晶体发生点阵上的缺陷--敏化中心。具有缺陷的晶格排列完整的晶格排列当核射线作用于溴化银结晶时,使某些分子电离射出电子,向敏化中心移动形成阴电层。AgB
3、r+β--Ag++Br+e-2、Ag+离子向敏化中心移动:Ag+离子向敏化中心移动,与电子结合,即射出的电子被带正电荷的银离子俘获,形成银原子。Ag++e+--Ag3、形成潜影许多带正电荷的银离子被显影剂还原成银原子,在该溴化银结晶颗粒中形成潜影。(二)潜影的消退:已经还原的银原子在水、氧的作用下重新变成离子,使已经形成的潜影消退。放射自显影的曝光过程应在干燥、低温或充氮气的环境下进行。(三)显影和定影显影液将银离子还原成银颗粒的过程显影液=显影剂+促进剂+保护剂+抑制剂显影剂:还原作用,米吐尔、海德尔促进剂:提供碱性环境,增加显影作用,常用碳酸钠保护剂:中和还原产物,亚硫酸钠抑制剂:抑制
4、未形成潜影的银盐分解,溴化钾定影:定影液溶解未形成潜影的银晶体。定影液=定影剂+保护剂+停显剂+坚膜剂定影剂:溶解银晶体,海波保护剂:抑制定影剂被酸分解,亚硫酸钠停显剂:终止显影液的继续作用,醋酸坚膜剂:防止乳胶膨胀、脱落、擦伤。钾矾三放射自显影的材料(一)感光材料:1、组成由银盐和明胶组成。银盐多为卤化银,如溴化银。明胶主要起支持作用;吸水膨胀后具有通透性2、分类:(1)原子核乳胶:溴化银和明胶按照一定的比例混匀制备而成;常温下呈粘稠液状,低温下则为胶冻状,温度升至40℃左右时为液态。可以根据使用需要制备成各种形态①液体核乳胶:由溴化银和明胶按照80:20的比例混合制备,可制备成不同形状
5、和厚度。②核乳胶干板:核乳胶胶片③揭膜核乳胶:中国原子能科学研究院物理生产的核乳胶乳胶型号核-2核-4HW-3HW-4银晶直径(μm)0.170.240.10-0.110.14适用范围α粒子11MeV以下的质子所有带电粒子所有带电粒子(电镜自显影)(2)氚片:由溴化银、碘化银和明胶组成。银晶体颗粒平均直径为1μm单面涂胶主要用于3H标记化合物的自显影(3)X线片:由溴化银、碘化银和明胶组成。银晶体颗粒平均直径为2.5μm双面或单面涂胶主要用于射线能量较高的宏观自显影乳胶类型溴化银直径(μm)乳胶层的厚度(μm)用途原子核乳胶0.1~0.24光镜、电镜自显影氚片1.05~10宏观自显影X光片
6、2.5~3.015~30核素能量较高宏观自显影(4)自显影增强剂:在感光材料里面加入荧光材料或将荧光材料制作成薄膜覆盖在凝胶表面。感光材料在射线和光子的双重作用下面感光,可以缩短实验周期。暗盒和增强屏(5)磷屏成像:用可重复使用的磷屏作为成像板专门的读出装置。计算机磷屏成像系统优点:可用于多种核素的宏观自显影操作简便不需胶片和显影定影等照相处理步骤磷屏可以重复使用缺点:分辨率较低目前还不能用于高倍光镜和电镜自显影仪器价格比较昂贵(二)放射自显影中常用的放射性核素应考虑其射线的种类、能量和半衰期。3H、14C、35S、45Ca、32P、33P、131I、125I、99mTc等。发射射线的核
7、素毒性都较大,一般不用于示踪研究。单纯的发射射线的放射性核素,难于在乳胶中形成潜影,自显影效果差。核素半衰期β-粒子最大的能量(MeV)β-粒子平均能量(MeV)3H14C32P35S45Ca59Fe89Sr125I131I12.33年5730年14.28天87.4天165天44.6天50.5天60.2天8.04天0.01880.1551.710.1670.2580.461(51%)0.269(47%)1.488——0
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