资源描述：
《甘草化学成分的高效液相色谱_串联质谱分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第32卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第2期2004年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry174~178甘草化学成分的高效液相色谱串联质谱分析*周燕王明奎廖循朱绪民彭树林丁立生(中国科学院成都生物研究所,成都610041)摘要采用高效液相色谱质谱联用方法分析了甘草(Glycyrrhizauralensis)中的化学成分。通过高效液相色谱可将三萜、黄酮及香豆素等50余种化学成分较好的分离。
2、根据紫外光谱可大致判断其化合物类型,由电喷雾质谱得到各成分的分子量,再由串联质谱获得进一步的结构信息,进而推测出其中22个主要成分的可能结构。它们分别是:葡糖基甘草甙、异光果甘草甙、夏拂托甙、甘草素4芹糖甙,甘草甙,6乙酰甘草甙,异佛来心甙,异甘草素葡萄糖芹菜甙,甘草糖甙A,甘草糖甙B,甘草素,3O[D葡萄糖醛酸甲酯(12)D葡萄糖醛酸]24羟基甘草内酯,甘草皂甙E2,异甘草素,甘草醇,甘草酸,甘草香豆素,甘草双氢异黄酮,甘草异黄酮甲,乌拉尔甘草皂甙乙,新甘草酚和甘草皂
3、甙B2。关键词甘草,化学成分,高效液相色谱质谱联用1引言甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhizauralensis)、胀果甘草(G.inflata)和光果甘草(G.glabra)的干燥根及[1]根茎,是最常用的中药之一。近年来,国内外学者已对十余种甘草属植物进行了化学成分的研究,从中[2][3,4][5]分离得到了一百多种化学成分,其主要的化学成分为黄酮类和三萜化合物,还有少量的生物碱,木[6][2]质素和香豆素等。甘草的化学成分比较复杂,而且由于品种和产地不同,其化学成分差异较大。所以,建立一
4、个微量、快速的定性定量分析方法,对于其质量检测和控制具有重要的意义。虽然用HPLC能对甘草化学成分进行较好的分离,但由于常规紫外检测所能提供的分子结构信息较少,故迄今为止主要用来[7~11]对甘草酸等特定成分进行分析和检测。日本学者也曾用HPLC对甘草中的化学成分进行了分析,从[12]n中鉴定了17个化合物。本实验采用HPLC/ESIMS联用方法对东北产甘草的化学成分进行分析,以nESIMS获得的准分子离子峰确定化合物的分子量。根据多级质谱(ESIMS)所得的碎片峰,结合紫外光谱、HPLC的保留时间以
5、及参考文献报道共推测出22个化学成分的可能结构。2实验方法2.1仪器和材料DECALCQ型质谱仪(美国Finnigan公司),TSP高效液相色谱,包括AS3000自动进样器,P4000四元梯度泵,带PDA的UV6000LP型紫外检测器。HPLC流动相所用甲醇和乙酸为色谱纯,其它试剂均为分析纯。2.2样品处理甘草样品购自内蒙古。取0.5g磨碎的甘草,加入3mL50%甲醇放置10h,在超声波上超声提取20min,过滤。再分两次加入2mL50%的甲醇超声提取5min并过滤。合并滤液,定容至10mL备用。2.
6、3色谱条件色谱柱:ThermoQuestC18不锈钢柱,250mm4.6mm,5m粒径;流动相:梯度洗脱,甲醇0.1%乙酸/水(1090)至(4060):0~20min;(4060)至(8020),20~80min;(8020)至(1000),80~120min。流速:0.4mL/min。柱温:室温。进样量:20mL。2.4质谱条件ESI源;源电压:3.5kV;负离子检测;鞘气(N2)流速:80a.u.;辅助气(N2)流速:15a.u.;碰撞气体为n氦气;毛细管温度:350;毛细管电
7、压:-5V。采用全离子扫描方式,扫描范围m/z100~1300。MS碰20030101收稿;20030918接受第2期周燕等:甘草化学成分的高效液相色谱串联质谱分析175撞能量:40%。3结果与讨论以甲醇/0.1%乙酸水溶液为流动相进行线性梯度洗脱可得到较好的高效液相色谱分离效果(图1)。由于甘草中主要的化学成分是三萜皂甙、黄酮和香豆素化合物,其分子中的羟基很容易形成稳定的氧负离子,所以用负离子电喷雾电离源作质谱检测所得总离子流图有较好的信噪比。HPLC的ESIMS的总离子流图(图1a)
8、与紫外全波长吸收(210~400nm)及2400.5nm的单波长吸收所得色谱图(图1b和图1c)基本吻合,但总离子流图的基线噪声较大,分辨率也差一些。由于不同类型成分MS离子强度响应或是UV吸收均有很大的不同,所以对于类型差异较大的甘草化学成分来说,用MS总离子流图或是UV色谱图的峰面积归一化法来定量分析其成分的相对含量会有较大的误差,不过可作为一个大致的参考。图1不同紫外波长检测的色谱图和质谱总离子流图Fi
