实验诊断学-病原微生物检查.ppt

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1、温州医学院检验医学院温州医学院附属第一医院临床病原体检测石亮P441临床病原体检查目的明确感染是否发生以及病原体的类型。提供体外微生物药物敏感实验的结果。密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。配合相关机构进行流行病学调查。本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染一、细菌检验标本采集与送检的基本原则1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。2.尽量在抗生素使用前采集标本。3.

2、在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行无菌操作，避免杂菌污染。4.立即送到实验室，某些细菌还应注意保温、保湿。5.盛标本容器须经灭菌处理，勿用消毒剂。参考P463二、常见标本的采集：血液与骨髓1.采血部位多为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，无菌操作。2.每瓶采血量为5～10ml左右，培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。3.选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药前采血。4.每例建议不同时间不同部位采血3次，注意区别感染菌和皮肤

3、污染菌。尿液标本的采集1.中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感染。不可从集尿袋下端管口留取标本。3.膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培养或婴幼儿。粪便标本的采集1.挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约2～3克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基中送检。2.对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集送检。呼吸道标本的采集1.自然咳痰：清水

4、反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰为好。2.气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。3.应及时送检和处理(<1小时)，放置时间长可导致肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。脑脊液等无菌体液标本的采集1.严格无菌条件下采集标本。2.尽量采集多的标本送检。3.尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特殊标本需保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。其它标本的采集(伤口、烧伤创面、脓肿等)1.无菌生理盐水清洗病灶表面后，

5、用无菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。2.对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无菌拭子采样。3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。三、检查方法1.直接涂片、镜检：初步诊断但阳性率低。如抗酸染色找结核杆菌。阴道毛滴虫革兰氏染色2.分离、培养、鉴定：金标准较费时（3天）,同时可进行药物敏感试验。3.血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差4倍以上有现症诊断价值，

6、但无早期诊断意义。（但IgM有早期诊断意义）主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染耐药性及发生机制1.当前临床分离的常见细菌(1)革兰阴性菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占70%。(2)革兰阳性菌葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、卡他布兰汉菌等，占30%。滥用抗生素的后果→耐药2.耐药机制(1)耐药基因的整合子系统(2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶(3)改变抗生素作用的靶位(4)细菌膜

7、的外排泵出系统(5)生物膜的形成，提高耐药性3、药物敏感试验(1)K-B纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便(2)稀释法包括琼脂稀释法和肉汤稀释法可获得最小抑菌浓度（MIC），但较麻烦(3)E试验：结合稀释法和扩散法，价格昂贵4.重点耐药菌株监测试验☆(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的筛选(2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌(HLAR)筛选(3)耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)筛选(4)染色体Ι型β-内酰胺酶AmpC酶的检测☆(5)超广谱ß内酰胺酶(ESBL)检测5.病原菌耐药基因的检测(1)适全生长缓慢的

8、细菌如结核分枝杆菌(2)对病原菌的耐药具有确证意义(3)考核其它耐药性检查方法的金标准,可能成为未来耐药性检查的主导方法。本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染一、流行病学和临床类型流行病学特征新的病原体不断被发现，如SARS病毒、禽流感染病毒等。老传染病死灰复燃如结核、梅毒、霍乱等多重耐药菌株不断出现器官移植、放/化疗、侵入性医疗检查或治疗导致医院感