RNA干扰沉默Ghrelin基因对仔猪胃酸分泌的调节作用.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2016，47(8)：1396—1400ISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．39696：issn．2095-1191．2016．08．1396RNA干扰沉默Ghrelin基因对仔猪胃酸分泌的调节作用杜改梅1，胡志华1，罗碧平·，吴结革1，张淼1，晏文梅1，刘茂军2+(1金陵科技学院动物科学与技术学院，江苏金陵210038；2江苏省农业科学院兽医研究所／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京210014)摘要：【目的】研究生长素(Ghrelin)基因沉默对仔猪

2、胃酸分泌的调节作用，为防治仔猪断奶后某些消化系统功能障碍或分泌异常研究提供新靶点，进而阐明Ghrelin对胃酸分泌的调节作用机制。【方法】采用脂质体将RNA干扰沉默的shGhrelin转染体外培养的猪胃黏膜上皮细胞，优化确立最佳转染条件，并通过荧光定量RT—PCR检测shGrelin转染对胃黏膜上皮细胞中Ghrelin基因mRNA表达及H+-K+-ATPase(质子泵)活性的影响。【结果】质粒(shGhrelin)与脂质体(Lipofectamine2000)的最佳转染比例为1：3，最佳转染时间24h。与正常对照组相比，以shGhrelin转染胃黏膜上皮细胞后，其Ghrelin基因mRNA

3、的表达显著降低(P

4、，HUZhi-hual，LUOBi-ping1，WUJie-gel，ZHANGMia01，YANWen-mei1，LIUMao-jun2+(tDepartmentofAnimalScienceandTechnology，JinlingTechnologyInstitution，Jinling，Jiangsu210038，China；2InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgricuhuralSciences／KeyLaboratoryofAnimalDiseasesDiagnosticandImmunology，MinistryofA

5、gricuhure／NationalCenterforEn百neeringResearchofVeterinaryBioproduets，Nanjing210014，China)Abstract：【Objecfive]TheregulatingeffectofGhrelingenesilencingongastricacidsecretionwereinvestigated，inordertoprovidenewtargetfordigestivesystemdysfunctionsordiacrisisofweaningpiglet，andthenclarifyregulationmec

6、hanismofghrelininthegastricacidsecretion．【Method】shGhrelinwastransfectedintoinvitroporcinegastricmucosalcellsusingliposome，andthetransfeetionconditionswerefurtheroptimized．TheeffectsofshGhrelintransfectiononGhre—lingenemRNAexpressionandH+-K+一ATPase(protonpump)activityweredetectedbyfluorescentquant

7、itativeRT—PCR．【ResultlTheresultsshowedthat，theoptimaltransfeetionratioofplasmid(shGhrelin)tolipofectamine2000was1：3，andtheoptimaltransfectiontimewas24h．Furthermore．aftershGhrelinwastransfectedintoinvitroporcinega