细胞培养基本方法：从体内到体外.ppt

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1、体外培养（invitroculture）的概念将活体结构成分取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。细胞培养（cellculture）组织培养（tissueculture）器官培养（organculture）体外培养技术的应用在组织学与胚胎学领域的应用在细胞生物学领域的应用在肿瘤学方面的应用在微生物学领域的应用在免疫学方面的应用在药理学领域的应用体外培养的优点简化细胞的生长环境方便施加实验因素容易观测实验结果便于获得均一细胞群能够进行大规模生物制品的生产体外培养的基本原理与技术一、从体内生存环境到

2、体外生长条件二、体外培养的基本方法和过程三、体外培养物的生长生物学四、细胞分离与纯化五、细胞系（株）、细胞克隆六、培养物的观察检测方法一、从体内生存环境到体外生长条件体外（invitro）培养技术就其实质而言，就是模拟体内（invivo）的生理环境，在无菌、适当的温度、湿度和一定营养条件下，使活体的结构成分在体外环境中生存和生长，并维持其结构和功能。一、从体内生存环境到体外生长条件（一）体内细胞生存的营养条件（二）体内细胞生存的其它条件（三）体外生长大环境（四）培养用液（五）细胞在体外生长的其它条件（六）清洗和消毒１、水

3、（water）２、无机盐（inorganicsalt）３、葡萄糖（glucose）４、维生素（vitamin）５、氨基酸（aminoacid）（一）体内细胞生存的营养条件１、温度（temperature）２、氧和酸碱度（oxygenandpowerofhydrogen）３、体液渗透压（osmoticpressureofhumor）４、细胞之间的相互联系（二）体内细胞生存的其它条件温度对细胞生存的影响高热(hyperthermy)对细胞生存的影响：高热导致酶的变性而失活破坏细胞膜的类脂质细胞核分裂异常破坏纺锤体细胞浆外层的

4、钙释放代谢停止细胞膜渗透性变化多极分裂出现停止在中期凝固酶使细胞凝固低温(hypothermy)大多数细胞在接近冰点的温度下仍能存活，当温度达到冰点时细胞活动就要相对停止。温度下降到冰点以下时，细胞外的水要发生结冰，因而使细胞周围的溶液浓缩。结果，水分从细胞扩散到周围的溶液中，使细胞中的溶质浓度升高。细胞中的溶质浓度升高对细胞是有害的。慢速冷冻：当细胞慢慢冷冻至-40℃时，细胞外的冰晶会通过细胞的孔隙进入细胞内引起冰晶。快速冷冻：使细胞内外都形成小的冰晶，不仅使细胞内的溶质浓度增高到有害的程度，而且细胞器也会遭到细胞内冰

5、晶的破坏。所以：　　在冷冻状态下，要减少细胞的损伤，应逐渐降温，而不宜迅速降温。低温(hypothermy)１、温度（temperature）２、氧和酸碱度（oxygenandpowerofhydrogen）３、体液渗透压（osmoticpressureofhumor）４、细胞之间的相互联系（二）体内细胞生存的其它条件２、氧和酸碱度（oxygenandpowerofhydrogen）氧酸碱度酸度和碱度的度量采用pH表示，pH即氢离子浓度的负对数值。各种组织细胞的正常功能及一切生物化学反应，都是在适当的和稳定的氢离子浓度下

6、进行的。大多数有机体的细胞所耐受的pH范围为6.0~8.0。人类血液的pH值一般维持在7.36~7.44。是细胞生存必不可少的条件之一。尽管一些细胞如骨骼肌细胞、红细胞可通过糖酵解而获得能量，但大多数细胞缺氧不能生存。１、温度（temperature）２、氧和酸碱度（oxygenandpowerofhydrogen）３、体液渗透压（osmoticpressureofhumor）４、细胞之间的相互联系（二）体内细胞生存的其它条件３、体液渗透压（osmoticpressureofhumor）体液渗透压主要来自体液中不能自由透

7、过细胞膜的颗粒。血浆晶体渗透压：由Na+、K+、Cl－、HCO3－等构成；血浆胶体渗透压：由血浆蛋白质等构成；正常血浆渗透压范围为：280~310mOsm/kg主要由晶体渗透压组成。等渗溶液(isosmoticsolution)：在正常血浆渗透压范围内的溶液；高渗溶液(hyperosmoticsolution)：高于310mOsm/kg的溶液；低渗溶液(hyposmoticsolution;)：低于280mOsm/kg的溶液。１、温度（temperature）２、氧和酸碱度（oxygenandpowerofhydroge

8、n）３、体液渗透压（osmoticpressureofhumor）４、细胞之间的相互联系（二）体内细胞生存的其它条件４、细胞之间的相互联系细胞间相互联系的基础是胞间通讯。胞间通讯有三种类型：直接接触型：特点是通过胞膜表面分子的结合直接联系；直接联系型：通过相邻的缝隙连接，直接完成信息传递；间接联系型：是细胞间通讯的最