秋水仙素与顺铂诱导Hela细胞调亡的定量多肽组学研究.pdf

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1、摘要多肽组学是一种可以定性和定量分析生物样品中的多肽的技术。这项技术可应用于发现疾病的生物标记分子、检测活性多肽、研究蛋白水解调控活性肽过程等方面。本实验应用多肽组学的方法研究在秋水仙素和顺铂诱导Hela细胞产生凋亡后，细胞内多肽水平的变化。细胞凋亡是生物体中一项非常重要的生理过程，在维持生物机体内环境稳态、免疫功能、生长发育等生命活动中具有重要的作用，因而研究凋亡过程具有重要意义。秋水仙素是一种用于治疗痛风和癌症的生物碱。它可以通过抑制微管蛋白聚合引起细胞凋亡。顺铂是一种重金属络合物，可结合于DNA上抑制DNA的复制过程，诱导细胞凋亡。尽管有很多方法解释秋水仙素与顺铂引起细胞

2、凋亡的机制，但这些药物引起细胞内多肽的变化还未见报导。另外，因为对细胞内多肽可能对很多生理过程包括凋亡过程可能会发挥作用缺乏认识，所以目前利用细胞内的多肽信息用于对细胞凋亡机制的研究是相当有限的。本研究用定量多肽组学方法检测了用200μM秋水仙素与50μM顺铂处理Hela细胞24小时后多肽的变化。结果如下：1.用CCK-8检测法检测秋水仙素与顺铂对细胞存活率的影响，随药物浓度增加，细胞活力下降。2.用200μM秋水仙素处理Hela细胞24小时后，一共鉴定出203种多肽，这些多肽来自101种不同的前体蛋白。其中有84种多肽发生显著变化。在这些明显变化的多肽中，有3条多肽是来自相应

3、的蛋白前体的N端，有24条多肽来自相应的蛋白前体的C端。其他的57条多肽则来自蛋白前体的中间部分。3.用50μM顺铂处理Hela细胞24小时后，共提取出61条多肽，这些多肽来自26种不同的前体蛋白。提取出的多肽中有34条多肽发生显著变化。这些显著变化的多肽中，只有1条多肽是来自相应的蛋白前体的N端，有14条多肽来自相应的蛋白前体的C端。其他的19条多肽则来自蛋白前体的中间部分。4.在两种药物处理细胞后提取出的相同多肽中，有些多肽在两种药物处理后均产生下调，有些多肽则只在一种药物处理后产生显著变化，没有发现共同上调的多肽，这可能与两种药物不同的作用机理有关。本实验中我们用一种有效

4、的分析方法对细胞发生凋亡的过程中的多肽进行了全面的分析。这是一种对凋亡过程研究的新方法。结果发现秋水仙素与顺铂改变了细胞内多肽的平衡，表明多肽可能在这些药物的生物学作用中发挥作用。关键词：多肽组学，凋亡，秋水仙素，顺铂，多肽变化IAbstractPeptidomicsisatechnologyofqualitativeandquantitativeanalysisofpeptidesinbiologicalsamples.Theapplicationsofpeptidomicsincludeidentifyingpeptidebiomarkersofdisease,identi

5、fyingbioactivepeptideandinvestigatingproteolyticregulationofbioactivepeptides.Inthisstudy,weappliedpeptidomicstoexaminethechangesofpeptideswithintheHelacellsaftertreatmentbycolchicineandcisplatinwhichinducecellapoptosis.Cellapoptosisisanimportantphysiologicalprocessesinlife,whichplayanimport

6、antroleinmaintaininghomeostasis,immunefunctionandgrowthanddevelopment.Therefore,itisofgreatsignificancetostudyapoptosisprocess.Colchicineisanalkaloidthathasbeenusedtotreatgoutandcancerforalongtime,anditcaninducecellapoptosisbyinhibitingmicrotubulepolymerizationwhichhasbeenwelldocumented.Cisp

7、latinisaheavymetalcomplex,anditcaninhibitthereplicationofDNAbybindingtoDNAandinduceapoptosis.Whiletherehavebeenmanywaystoexploretheapoptosismechanisminducedbythesetwokindsofmedicine,theimpactofcolchicineandcisplatinonintracellularpeptideshasnotbeen