《鉴定生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的实验》疑难导析 文档.doc

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1、《鉴定生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的实验》疑难导析曾小军（江西省泰和县第二中学343700）1、鉴定生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的实验原理是什么？某些化学试剂能够使生物组织中的有关化合物，产生特定的颜色反应，根据颜色反应鉴定生物组织中有糖、脂肪和蛋白质的存在。还有，如：鉴定DNA用二苯胺（沸水浴）出现蓝色反应。如用0.01g/mL或0.02g/mL醋酸洋红液（或龙胆紫溶液）鉴定出现红色（或紫色）颜色反应，则为染色体。2、做可溶性糖的鉴定实验，为什么选择苹果或梨？因其含可溶性糖量较高，颜色为白色或近于白色。有些单子叶植物如韭菜、鸢尾并不将光合作用的初始产物转为淀粉，故叶子内含有

2、大量的可溶性还原糖，但由于叶片中叶绿素较多且颜色深，对需要观察的颜色反应起着掩盖作用。因此，最好不选用单子叶植物的叶子作为实验材料。由于甘蔗薄壁组织和甜菜的块根虽然富有近于白色的蔗糖，但蔗糖无还原性，即不能与斐林试剂反应生成砖红色沉淀。至于蔗糖液经稀盐酸处理后可以与斐林试剂反应产生砖红色沉淀，是由于蔗糖在酸性条件下被水解成可溶性还原性单糖的缘故。3、为什么花生需浸泡约3～4h，黄豆需浸泡1～2d？浸泡3～4h，花生最适于切片，黄豆浸泡1～2d后，适于研磨。4、在使用斐林试剂时应注意什么问题？(1)斐林试剂甲和乙既然混合后使用，一定要使用时临时配制按实验要求的溶液量所临时配制的Cu（O

3、H）2悬浊液（PH＞14），Cu2+主要以溶于水的[Cu（OH）4]2－络阴离子形式存在，这样有利于Cu2+与醛基的接触而充分反应。若放置时间过久，斐林试剂不稳定,OH－会和空气中的CO2反应，导致（OH）降低，[Cu（OH）4]2－络阴离子分解生成蓝色Cu（OH）2沉淀，不利于Cu2+与醛基的接触。(2)用斐林试剂鉴定时，即斐林试剂甲液和斐林试剂乙液必须混合后再加入因为若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu（OH）2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。5、鉴定可溶性还原糖实验中为什么要水浴

4、加热？直接加热是否可以？为什么在实验过程出现“藍色—棕色—砖红色”？解答：实验证明，直接加热至沸腾30s时，迅速出现砖红色沉淀；继续加热，溶液变成黑色。所以直接加热不容易掌握加热程度，时间稍长就会使砖红色的Cu2O转化黑色的CuO，就不能再鉴定可溶性还原糖了。通过水浴加热可以保持反应的适宜温度，较长时间观察所需的反应颜色变化。反应开始时，生成的砖红色Cu2O与藍色Cu（OH）2混合出现棕色，随着反应的进行，Cu（OH）2全部被还原砖红色Cu2O沉淀，故颜色变化为：藍色—棕色—砖红色。6、蛋白质稀释液在制备时为何要稀释？为了避免蛋白液与双缩脲试剂发生反应后黏固在试管内壁上，使反应不彻底

5、，且试管也不易刷洗。7、怎样正确使用双缩脲试剂？使用时，应先向盛有黄豆组织样液的试管中加入双缩脲试剂A，即0.1g/mL氢氧化钠溶液，混合均匀，造成一个碱性的反应环境，然后再加双缩脲试剂B，即0.01g/mL的硫酸铜溶液，注意加入3～4滴即可，不能过量，否则硫酸铜在碱性环境中生成氢氧化铜沉淀而遮蔽反应过程中产生的紫色，影响实验效果。