临床蛋白电泳及进展

《临床蛋白电泳及进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、临床蛋白电泳及进展分散介质屮的带电粒了在肓流电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳（electrophoresis）o蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动，这就是蛋白质的电泳现彖。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界血电泳技术，并成功地将血清蛋口质分成儿个组分。从此以后，随着电泳技术的不断发展，蛋口电泳成为蛋口质化学研究和临床实验诊断屮必不对少的重要方法。口前电泳方法可分为：门由界而电泳和区带电泳两人类。因区带电泳应用比较广泛，故木文将主要介绍蛋白质区带电泳技术在

2、临床实验诊断中的一些应用和研究进展。一、基本知识1•电泳的基木原理不同物质的质点由于带电性质的不同，在一定的电场强度下移动的方向和速度不同。如溶液中冇一电荷电量为Q的粒了，在一定强度的电场中移动，设电场强度为F,粒子的移动速度为忆WF表示单位电场强度下带电粒子运动速度，称为迁移率（mobility）,用“表示，它与粒子半径（厂）,粒子的带电量（Q）,溶液的粘度（〃）有如下的关系：以上公式仅适用于球形粒了，许多生物人分了如蛋白质上带有可电离的基团，在溶液屮离解后形成的离子并非球形，因而实际测得的离子迁移率比以上公式算得的值要小一些。设〃为

3、粒了移动距离，r为电泳时间，电场强度f为单位距离内的电位差（△〃），厶为两电极间的距离，则两物质A、B移动距离的差△〃为：由上式可知，物质A和物质B能否分离，取决于两者的迁移率。如果A和B的迁移率冇足够大的差别，将能彼此分开。2•影响电泳的主要因素⑴电场强度电场强度也称电位梯度，它是指单位长度的电位降。电场强度对电泳起重要的作用。电场强度愈大，则带电粒子的移动愈快。根据所用电场强度大小，可将电泳分为常压电泳（100〜500V）和高压电泳（500〜10000V）。常压电泳分离时间长，多用于分离蛋口质等大分子物质；高压电泳分离吋间短，多用來

4、分离氨基酸、多肽、核酸等小分子物质。⑵溶液的pH值溶液的pH值决定了物质的解离程度，也决定了带电粒子所带的净电荷。溶液的pH值离等电点愈远，则粒了所带的电荷愈多，电泳速度愈快。在分离某一蛋白质混合物时，应选择适宜pH值，以利于各蛋白质组分的分离。为了使溶液pH值在电泳过程中恒定，须使用缓冲溶液。⑶溶液离子强度离子强度影响粒子的电动电位（$电位），不宜过高或过低，一般最适宜的离了强度在0.02〜0・2mol/kg。⑷电渗在电场作用下液体对固体支持物的相对移动称为电渗。由丁•电渗现彖往往与电泳同吋存在，所以带电粒子的移动同时受电渗影响。如电

5、泳方向与电渗相反，则实际电泳的距离等于电泳距离减去电渗的距离。在选择支持物时应注意尽量避免选用高电渗作用的物质。⑸其它影响因素缓冲液的粘度，缓冲液与带点粒子的相互作用以及电泳吋的温度变化等因素也都影响电泳的速度。二、基本技术概述1•醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维索是指纤维素的疑基乙酰化形成的纤维索醋酸酯，由该物质制成的薄膜称为酷酸纤维薄素薄膜。它具有电渗小、分离速度快、分离清晰、血清用量少及操作简便等优点，现C广泛用于血清蛋匚I、血红蛋白、糖蛋匚I、脂蛋白和同工腮等的分离和测定。2•凝胶电泳凝胶电泳根据支持介质的不同可分为淀粉胶、琼脂糖凝胶

6、和聚内烯酰胺凝胶电泳等。琼脂糖凝胶孔径较人，对蛋白质一般不起分子筛作用，适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛作川，有更高的分辨率，普遍川于分离蛋口质及小分子核酸。3•等电聚焦电泳(isoelectricfocusing,IEF)等电点是蛋白质的一个重要性质，测定等电点的方法是在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率，然后用迁移率对pH作图，对应于迁移率为零的pH就是蛋口质的等电点。按照蛋口质等电点不同而进行分离的电泳方法称为蛋白质等电聚焦电泳。由于英分辨率可达到O.OlpH单位，故特别适用于分离分了屋相近而等电

7、点不同的蛋白质组分。4•毛细管电泳(capillaryelectrophoresis,CE)毛细管电泳是八十年代初发展起来的一类高效、快速分离分析方法。同其它技术相比，毛细管电泳具有分辨率高、塔板数高、选择性好、定量准确、所需样品少等特点。毛细管电泳将电泳载体移到毛细管中后，克服了传统电泳的热扩散和试样扩散的难题，人人提高了分析的灵敏度。因而它是一种比传统电泳优越得多的分离分析技术。毛细管电泳可分为毛细管区带电泳、凝胶电泳、等速电泳、等电聚焦和胶束电动色谱等。在生命科学屮广泛使用的是毛细管区带电泳(capillaryzoneelectr

8、ophoresis,CZE)o毛细管区带电泳是近年发展起来的一种高效、快速的液相分离分析技术，冇分离选择性高、检测灵敏度高、分离快速、操作简便和易口动化等特点，现已开始在临床实验诊断屮得到逐步地应用。三、临