标准菌株验证鉴定步骤

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1、标准菌株验证鉴定步骤1、菌种活化：干粉标准菌株一一标准贮备菌株一一工作菌株1.1金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36°c±rc培养18-24小时。并观察菌落形态。乩金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明；b.大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；c.铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；d・枯草芽抱杆菌：表面粗糙不透明，镜检菌体有芽砲。1・2白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂培养

2、基平板或PDA琼脂平板上，30°C-35°C培养24-48小时。本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌人5〜6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上，23°C-28°C培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙。1.3生抱梭菌：挑取部分干粉溶解T0.9%无菌氯化钠溶液中，接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30°C〜35°C培养18-24小时；或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上，30°C〜35°C厌氧培养18-24小时。2、菌种鉴定：2.1金黄色葡萄球菌：革兰氏染色试验：革兰氏阳性菌（紫色），

3、葡萄状排列，球菌。兔血浆试验：接种1个单菌落于1支兔血浆溶液中，30°C-35°C培养至6小时，每半小时观察一次。凝固为阳性。金黄色葡萄球菌为阳性反应。2.2大肠埃希氏菌：革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。IMVC生化试验：a1大炳填榕氏菌耳非大氏窗的生化鉴別MMa>Vltil(fR>柠・*輩（O——•PA•族冷氏・———鼻戈■堆希氏債■十—肉＞6中刿见————十負型产％篇—注山■出4U1以外第生化馳創—1分!!•■■复试2・3铜绿假单胞菌:革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。氧化酶试验：将氧化酶试纸用蒸镭水浸湿，用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落，涂在试

4、纸上。在60s内变为蓝色或蓝紫色为阳性，不变色为阴性。绿脓菌素试验：取斜而培养物接种于PDP琼脂培养基斜而上，培养24小时，加三氯甲烷3〜5ml至培养管屮，搅碎培养基并充分振摇。静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入lmol/L盐酸试液约lml,振摇后，静置片刻，观察。若盐酸溶液呈粉红色，为绿脓菌素试验阳性，否则为阴性。木菌为绿脓菌素试验阳性。荧光试验：接种于金氏B培养基（或假单胞菌产荧光色素培养基）±,36°C±1°C培养18-24小时，在366nm紫色灯下有蓝绿色荧光。2.4枯草芽抱杆菌：菌落形态：表而粗糙不透明，有皱摺。用芽抱染色液染色,菌体有芽泡。2.5

5、白色念珠菌：革兰氏染色试验：呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5〜6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。念球菌显色培养基：30-35°C培养24-48小时，呈绿色菌落。产芽管试验：挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35〜37°C、1〜3小时，置显微镜下观察，可见到由抱子长出短小芽管。2.6黑曲霉：23°C-28°C培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙，有黑色孑包子产。2.7生抱梭菌：革兰氏染色试验：革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽砲。哥伦比亚琼脂培养基试验：接种丁-含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养

6、基平板上，置厌氧条件下培养48〜72小时，应生长。过氧化氢酶试验：滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。本菌为阴性反应。3、需购买试剂:株金黄色培养基及试剂HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117兔血浆、HB0109-7营养葡萄球菌琼脂培养基大肠埃希氏菌HBTG13HBT大肠杆菌生化鉴定条、HB8280甲基红试剂盒、HB8281V-P试剂盒、HB8279Kovacs氏靛基质试剂盒铜绿假单胞菌HB5187绿脓菌素测定培养基(PDP)、HB2100氧化酶试纸、HB8484假单胞菌产荧光色素培养基枯草芽砲杆菌HB8300芽砲染色

7、液白色念珠菌HB7015念球菌显色培养基、HB0236-11%吐温80-玉米琼脂培养基黑曲霉HB4701改良马丁琼脂培养基生砲梭菌HB0124-1哥伦比亚琼脂培养基、HB0124-la硫酸庆大霉素(4mg/支)、I1B86503%过氧化氢试液