临检实验设计

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1、Hb测定一、技术背景测定方法有：①HiCN测定法②SDS-HB测定法③HiN3测定法④AHD575测定法⑤CTAB测定法WHO推荐参考方法：HiCN测定法原因：操作简单，反应迅速；所用转化液稳定易保存；可检测除SHb外的所有Hb；HiCN参考品可长期保存，便于质控。二、实验原理血液经氰化高铁血红蛋白转化液稀释后，红细胞被破坏，释放出血红蛋白，除SH外，其余血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi与CN－结合生成稳定的棕红色复合物氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm处有吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，再换算成每升血液中的血红蛋白浓度

2、，或用HiCN参考液进行比色法测定制作标准曲线供查阅。三、器材、试剂选择器材：（1）、采血针、微量吸管、75%乙醇棉球及碘液、乳胶吸头（2）试剂、试管架（3）5ml吸管、吸耳球（4）分光光度计试剂：（1）HiCN转化液（文齐氏液）：氰化钾0.050g，高铁氰化钾0.20g，无水磷酸二氢钾0.140g，TritonX-100（非离子表面活性剂）1.0ml，加蒸馏水至1000ml，调节pH值至7.0—7.4。棕色玻璃瓶试剂避光保存。（2）标准品：100g/l血红蛋白四、标本EDTA-K2抗凝静脉血或毛细血管血五、实验步骤直接定量测定法1、加转化液：用吸管吸取HiCN

3、转化液5ml加入试管内。2、采血与转化：采集毛细血管或者静脉血20ul，加入转化液中，封闭试管口后颠倒混匀，室温下放置5分钟，使Hb全部转化为HiCN。3、测定吸光度：在分光光度计上，使用540nm波长，以HiCN转化液或蒸馏水为空白调零后，测定标本的吸光度值（A）。4、计算Hb（g/l）=（A测×100g/l）/A100A测为540nm处测定的标本吸光度，A100为标准品在540nm处测定的吸光度。5、报告方式：XXg/l6、参考区间成年：男性120—160g/l，女性110—150g/l。新生儿：170—200g/l。六、临床意义通过红细胞计数、血红蛋白测定

4、及血细胞比容测定即可确定贫血的存在程度。血红蛋白增多有以下情况：(1)生理性增多：见于高原居民胎儿和新生儿，剧烈活动、恐惧冷水浴等；(2)病理性增多：见于严重的先天性及后天性心肺疾患和 血管畸形如 法洛四联症、 发绀型 先天性心脏病、阻塞性肺气肿、肺源性心脏病、肺动脉或肺静脉瘘及携氧能力低的 异常血红蛋白病等；也见于某些肿瘤或肾脏疾病，如肾癌肝细胞癌、肾胚胎瘤及 肾盂积水、多囊肾等。血红蛋白减少见于以下情况：(1)生理性减少：3个月的婴儿至15岁以前的儿童主要因 生长发育迅速而致的造血系统造血的相对不足，一般可较正常人的低10%-20%。妊娠中期和后期由于妊娠血

5、容量增加而使血液被稀释老年人由于骨髓 造血功能逐渐降低，可导致红细胞和血红蛋白含量减少。(2)病理性减少：A.骨髓 造血功能衰竭如再生障碍性贫血、骨髓纤维化所伴发的贫血。B.因造血物质缺乏或利用障碍所致的贫血如缺铁性贫血、叶酸及维生素B12缺乏所致的 巨幼细胞性贫血。C.因红细胞膜酶遗传性的缺陷或外来因素所致红细胞破坏过多而导致的贫血，如 遗传性球形红细胞增多症、海洋性贫血 阵发性睡眠性血红蛋白尿、 异常血红蛋白病、 免疫性溶血性贫血心脏体外循环的大手术或某些生物性和化学性等因素所致的溶血性贫血以及某些急性或慢性失血所致的贫血。七、质控1、标本：血红蛋白检测原理

6、是比色法，引起血清浊度增大的因素常致血红蛋白浓度假性增高，如高脂血症、高球蛋白、高白细胞（WBC＞30×109/L）、HbCO增多及高血小板（Plt＞700×109/L）等。2、器材及试剂：定期校准分光光度计，分光光度计的波长和光程必须准确、灵敏度高、线性好、无杂光，否则会影响结果准确性。选用合格的微量采血管、刻度吸管及比色杯。保证试剂的质量。3、技术操作：消毒、采血、稀释、混匀等应合格。确保HbCO完全转化，可延长转化时间或加大试剂中高铁氰化钾的用量。4、废弃物处理：HiCN转化液中KCN是剧毒品，配制转化液时要按剧毒品管理程序操作。为防止KCN污染环境，比色

7、测定后的废液应妥善处理。八、注意事项1、试剂保存：试剂保存于棕色瓶内，不得使用塑料试剂瓶。可以冷藏保存，但不能冷冻，防止因丢失CN-而导致血红蛋白转化不完全。2、做好安全防护3、分光光度计校正4、消除异常标本的干扰：白细胞过多引起的浑浊，可离心后取上清液比色。球蛋白异常增高引起的浑浊，可改用高氯化钠的转化液后重新测定。九、方法学评价优点：操作简单，反应迅速；所用转化液稳定易保存；可检测除SHb外的所有Hb；HiCN参考品可长期保存，便于质控。缺点：KCN试剂有剧毒；不能测定SHb；对HbCO反应较慢；遇高白细胞和高球蛋白血症的血标本会出现浑浊。PLT分类计数一、

8、混悬液滴入计数池后应静置