RECK在大肠癌中的表达及临床意义

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1、RECK在大肠癌中的表达及临床意义RECK在大肠癌中的表达及临床意义【摘要】目的研究RECK在大肠癌及正常大肠组织中的表达，探讨其与大肠癌转移与预后的关系o方法应用免疫组织化学法(SABC)检测50例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中RECK的表达。结果RECK在大肠癌组织中的阳性表达率为64%,明显低于在正常大肠黏膜组织屮的表达(100%)(P<0.05),并随肿瘤病理分化程度的降低、临床Dukes分期的提高、淋巴转移的产生而降低(P〈0.05)。结论大肠癌组织中RECK低表达，RECK叮能在大肠癌的转移过程中起重要作用。【关键词

2、】大肠癌；RECK大肠癌是人类主要的恶性肿瘤之一，居恶性肿瘤发病率第三位。侵袭和转移是影响大肠癌患者疗效和预后的重要因素。RECK基因是1998年发现的一种抑癌基因，研究表明其通过抑制MMPs与肿瘤血管生成阻断肿瘤侵袭和转移。本研究应用免疫组织化学法(SABC)检测50例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中RECK的表达，并通过分析大肠癌组织中RECK的表达与临床病理因索的关系，以期寻找大肠癌判断预后的分子指标。1材料与方法1・1仪器和试剂浓缩型RECK兔抗人mAb购于美国SantaCruzBiotechnology公司。SABC免疫

3、组化试剂盒购自武汉博士徳生物科技有限公司。1.2组织标本采集及处理收集武汉市第八医院2007年8月〜2008年3月手术切除的大肠癌组织标本50例,以癌组织中心组织为癌症组，随机抽取20例，取距癌中心组织10cm处正常组织为正常对照组。50例大肠癌患者中男24例(年龄33〜88岁，平均56.58岁)，女26例(年龄35、80岁，平均61.96岁)。所有病例均无糖尿病、糖耐量异常病史，术前均未作放疗和化疗。并按国际癌症协会所定的标准行分化程度分级和Dukes分期，所有癌组织均经病理检验确诊，所有作为正常对照组织的断端组织均未发现癌细胞。标

4、本均经过4%中性甲醛溶液固定后常规右蜡包埋，4uni连续切片备用。1・3方法免疫组织化学SABC法检测RECK的表达，用已知的RECK阳性的正常大肠组织切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。切片经脱蜡处理后，3%H20220min阻断内源性过氧化物酶，止常山羊血清室温封闭30min后,按步骤分别滴加一抗RECK(1:100)、MMP-2(1:75)和生物素化的二抗(1:100)及SABC试剂，DAB染色，然后常规复染、脱水、透明、封片后镜下观察。1.4染色结果判断用Olympus显微镜及显微摄像仪对染色组织切片进行观察、照

5、相。先在低倍镜(40X)下观察表达情况，RECK蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质。转高倍镜下随机选取5个视野(每个视野观察细胞数不少于200个)，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。按切片中细胞着色深浅评分：0分，细胞无显色；1分，浅黄色；2分，棕黄色；3分，棕褐色；按阳性细胞数占同类细胞数的百分比，〈35%为1分，35%〜70%为2分，>70%为3分。取，两项评分的乘积作为总积分，0~2分为阴性(-)，3~4分为阳性(+),M4分为强阳性(++)o1.5统计分析应用SPSS16.0统计软件进行统计学处理，各组间阳性表达率用x

6、2检验。2结果2.1RECK的表达和分布RECK在正常大肠黏膜组织屮的阳性表达率为100%(20/20),主要分布在正常结肠黏膜腺体细胞的细胞质和细胞膜。RECK在大肠癌组织中的阳性表达率为64%(32/50),明显低于在止常大肠黏膜组织中的表达(P<0.05)o(见表1)。2.2RECK在大肠癌中的表达与临床病理因素的关系RECK蛋口阳性表达率与大肠癌患者的性别、年龄无关(P>0.05),并随肿瘤病理分化程度的降低、临床分期的提高及淋巴转移的产生逐渐降低(P〈0.05)o(见表2)。表1RECK在大肠癌组织及正常大肠组织中的表达Ta

7、b1RECKproteinexpressionincolorectalcancertissuesandnormalcolorectalmucosatissues例数RECKx2P阴性阳性阳性率(%)大肠癌组正常大肠组5020183264%020100%9.6920.002表2RECK的表达与临床病理因素的关系Tab2CorrelationbetweenthelevelsofRECKexpressionandclinicpathologicalfactors例数RECKx2P阴性阳性阳性率(%)性别男女年龄(岁)260<60分化程度高、

8、中分化低分化Dukes分期A+B(无淋巴结转移)C+D（有淋巴结转移）2435151931101560.081768.021789.5161548.48.7478.6310.0030.00326252591562.5i9