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《灌胃给予中药复方的大鼠血清对高糖和糖基化终末产物诱导的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、灌胃给予中药复方的大鼠血清对高糖和糖基化终末产物诱导的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的影响王琼1,2李璇2严士海1王海丹1朱荃2(通讯作者)(1江苏省中医院基础药理实验室江苏南京210029)(2南京屮医药大学国家规范化屮药药理实验室江苏南京210029)【摘要】目的观察灌胃给予中药复方的大鼠血清对高糖和糖基化终末产物(AGEs)诱导的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的影响。方法体外培养的肾小球系膜细胞(glomerularmesangialcells,GMC),模型组采用25mmol/L葡萄糖和0.25mg/mlAGES共培养三周，药物组给予高糖和AGES的同时采用灌胃给予屮药复方的大鼠血清(
2、0.01%,0.1%,1%,5%)进行干预，酶促微量反应法测定肾小球系膜细胞内山梨醇含量。结果灌胃给予中药复方后的大鼠血清(0.1%、1%)能显著降低高糖和AGES引起的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的升高。结论灌胃给予中药复方后的大鼠血清能显著抑制高糖和AGEs引起的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的升高。【关键词】糖尿病肾病屮药复方肾小球系膜细胞山梨醇【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号]2095-1752(2012)30-0050-02糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病屮最严重的慢性并发症，目前，糖尿病肾病的防治除了严格控制血糖水平及肾素血管紧张
3、素转换酶抑制剂外，尚无公认的治疗药物。前期研究表明，中药复方(大黄、黄罠、川茸、口术、茯苓等)能抑制AGEs引起的大鼠肾小球细胞膜细胞增殖及系膜基质增生[l]o本文采用血清药理学方法，进一步观察灌胃给予屮药复方的大鼠血清对高糖和AGEs诱导的细胞内山梨醇含量的影响。1材料1.1试剂和药物DMEM培养基,InvitrogenCorporation；新生牛血清,杭州四季清血清厂；NADH辅酶&lota;,中国医药(集团)上海化学试剂公司；甘氨酸，上海康达氨基酸厂。1.2动物SD大鼠，上海斯莱克实验动物责任有限公司，合格证号：SCXK(沪)2003-0003o1.3细胞株大鼠肾小球系膜细胞株
4、HBZY21,由武汉细胞生物研究所提供。2方法2.1中药复方给予人鼠后的血清制备方法：药物血清组以10・8g生药/kg的中药复方灌胃给予大鼠，空白血清组以生理盐水灌胃。灌胃容积均为lml/100g,每组4只动物。一日剂量分2次服，连续给药3天，第4天1次服用全天剂量，末次给药2小时后采血。分离血清,56°C30分钟灭活，过滤除菌，・20°C冰箱保存备用。2.2细胞培养及样品处理将鼠肾小球系膜细胞接种于细胞瓶中，采用25mmol/L葡萄糖和0.25mg/mlAGEs诱导细胞，给药组分别加入浓度为DQ-S-l(herbserum0.01%)、DQ-S-2(herbserum0.1%)、DQ
5、-S-3(herbserum1%)>DQ-S-4(herbserum5%)的灌胃给予中药复方得到的大鼠血清，设立相同的空白血清对照分别为S-l(serum0.01%)、S-2(serum0.1%)xS-3(serum1%)>S-4(serum5%),共培养三周。大鼠肾小球系膜细胞传至第3周结束时用细胞刮将贴壁细胞刮下，调细胞数为5×104个，用D-Hanks洗涤2-3次，最后1次洗涤弃去D-Hanks液，加入lml双蒸水，细胞超声波粉碎机超声及反复冻溶破膜，留做检测。2.3酶促微量反应法测定山梨醇含量⑵采用间接荧光法检测细胞内山梨醇的含量，反映AR的活性。①试剂配制山梨醇脱
6、氢酶(SDH)母液:精密称取SDH2mg,以0.05mol/L甘氨酸・NaOH缓冲液配至ImL,每份100μLo-20°C冻存，3个月内用完。酶反应液：精密称取NAD+2mg,取SDH母液1份，置10mL容量瓶中，以0.05mol/L甘氨gg-NaOH缓冲液定容至10mL,4°C避光保存，5d内用完。②细胞内山梨醇含量测定细胞破膜后3000r/min,离心lOmin,取上清1OOμL,加入酶反应液1OOμL,37°C反应30min,取出在SPECTRAMAXGEMINIXS下366/455nm处测定荧光值。2.4统计学处理以t检验进行统计学处理，数据以x・&plusm
7、n;s表示。3结果3.1灌胃给予中药复方的大鼠血清对高糖诱导的鼠GMC内山梨醇含量的影响表1灌胃给予中药复方的大鼠血清对高糖诱导的***P<O.Olvscontrol#P<0.05vsS-2AP<0.05vsS-3由以上结果可见，灌胃给予中药复方后的大鼠血清（0.1%、1%）能显著降低高浓度的葡萄糖引起的肾小球系膜细胞内山梨醇含量的升高。3.2灌胃给予复方DQ101的大鼠血清对AGEs培养下的鼠GMC内山梨醇含量的影响表2灌胃
