药物代谢研究方法

《药物代谢研究方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、药物代谢研究方法1•肝脏代谢的研究方法肝脏代谢的研究方法中有肝微粒体温孵法、肝细胞体外温孵法、肝脏灌流技术、肝组织切片法、基因重组P450酶系、微透析技术等。⑴肝微粒体温孵法-肝微粒体法是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，在模拟生理温度及生理环境条件下进行生化反应的体系，一般采用差速离心法获得肝微粒体。此法制备简单，代谢时间短，易于重现，方便大量操作以积累代谢样品供结构研究；同时，该方法可用于对药酶的抑制及体外代谢清除等方面的研究，因而应用较为普及。⑵肝细胞体外温孵法-本法同肝微粒体法相似，即以制备

2、的肝细胞辅以氧化还原型辅酶，在模拟生理温度及生理环境条件下进行生化反应，适于研究蛋白及mRNA水平药物代谢酶诱导及酶活性，在评估药物代谢过程中药物间的相互作用时，该方法得到广泛的应用。⑶肝脏灌流技术-该技术使肝脏具有独立并接近于生理条件的循环体系，在严格控制的条件下，药物与灌流肝脏接触，然后通过肝静脉液与门静脉液分析、肝脏生化指标的测定以及肝脏纵切片检查，以确定药物在肝脏发生的变化以及对肝脏的效应。肝脏灌流技术大体上可分为3大类：离体肝灌流、在体肝灌流及在体肠■肝灌流技术，又同时分为：循环型和一过型。

3、⑷肝组织切片法-肝组织切片法不破坏肝脏的细胞构成和组织结构，不仅完整保留了所有肝药酶及各种细胞器的活性，而且保留了细胞与细胞间的联系及一定的细胞间质，因而更能反映药物在休内生理条件下的实际代谢情况，代谢活性可保持旷24h,但因为组织切片机的价格昂贵，所以应用受到限制。⑸基因重组P450酶系-基因重组P450酶系具备分子生物学技术优势,因而具有分子水平的特点，较其他的体外肝代谢方法更能具体量化的研究药物代谢，在药酶诱导特异性和选择性研究上优于其他的体外方法，并可为药物与酶在结合位点的相互作用研究提供更多

4、的信息。⑹微透析技术■■微透析技术是一种在体取样技术，可连续跟踪体内多种化合物随时间的变化；取样无需匀浆过程，可真实代表取样位点化合物的浓度，且样品因不含蛋白质、酶等大分子物质，可不经预处理直接用于测定；用于研究药物代谢，可维持实际牛理条件，消除了传统药物代谢研究中因组织均匀化破坏细胞隔室造成对代谢研究结果的影响，并可获得有关药物代谢中间过程的信息，而传统方法只能了解代谢的最终产物，不能反映其中间过程。2•胃肠道代谢的研究方法胃肠道是口服药物的必经通道，近年来随着人类对肠道菌不断认识,胃肠道作为药物代

5、谢的重要部位越来越引起研究者的重视。⑴粪便温孵法-该法H前应用最广泛的胃肠道代谢研究方法，由于肠道内需氧菌只占肠道菌丛的极少部分，其绝大多数的厌氧菌是药物代谢的主耍角色，因此，粪便温孵法主耍就是制造适合厌氧菌生长的厌氧环境和营养条件，在此条件下，加入药物与细菌混合、温孵，然后检测药物原型成分和代谢产物的种类和数量。⑵单一菌种温孵法―即用单一菌种与药物共同进行厌氧培养，然后检查药物代谢情况的方法。⑶肠菌酶法-肠菌酶法即把由肠菌中分得的酶作用于药物，间接地研究肠道菌对药物作用的方法。