聚合物----------双水相分离乳清分离蛋白中α―乳

《聚合物----------双水相分离乳清分离蛋白中α―乳》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、聚合物/*********双水相分离乳清分离蛋白中α―乳　　摘要：建立了基于聚（乙二醇ran*********）单丁基醚（聚合物）与*********、氯化钠的双水相体系对乳清分离蛋白（WPI）中的α乳白蛋白（αLA）和β乳球蛋白（βLG）进行分离，并对其分离条件进行了优化。系统地研究了双水相体系pH值、聚合物与KH2PO4溶液体积比、NaCl添加量和WPI浓度对αLA和βLG的分离效果的影响，采用液相色谱法对αLA和βLG的分离效果进行评价。结果表明，聚合物/KH2PO4双水相体系pH=4.0，40%（

2、m/m）聚合物与15.5%（m/m）KH2PO4的体积比为4mL∶4mL，NaCl添加量为0.40g/10mL，WPI浓度为1mg/mL时，αLA和βLG分离效果最好，上相中αLA的萃取率为98.2%，下相中βLG的萃取率为96.6%。中国论文网http://www.xzbu.com/8/view-7843763.htm　　关键词：双水相；乳清分离蛋白；聚（乙二醇ran*********）单丁基醚；分离　　1引言　　乳清分离蛋白（WPI）是蛋白质混合物，在乳清分离蛋白中，α乳白蛋白（αLA）和β乳球蛋白（

3、βLG）的含量占总WPI含量的80%以上[1]，并被广泛应用于食品、医药、精细化工等领域，因此具有很高的商业价值[2，3]。现已发现αLA具有多种生理功能，人αLA可以被转化成一种可以诱导肿瘤细胞凋亡的蛋白质，牛αLA也可以被转化成这种对肿瘤细胞有相似活性的物质。在αLA中发现有血管紧张素转移酶（ACE）抑制活性，含有ACE抑制肽的水解产物已经用于高血压患者的血压控制。βLG具有优异的热与冷凝胶特性以及良好的氨基酸谱。然而，儿童对βLG有过敏效应，因此在水解或脱除这种蛋白质后再应用于婴儿或低敏人群[4]。

4、　　近年来，双水相体系（ATPS）常应用于分离乳蛋白中各种单体蛋白质。2011年，Jara等[5]采用乳清分离蛋白浓缩物（WPC）/羟丙*********纤维素作为双水相体系，分离WPC中的αLA和βLG，结果表明，分子量低的蛋白质αLA和βLG均被保留在上相，分配比例高达90%，但两种蛋白未能分开。Alcntara等[4，6]利用响应面分析法优化WPI在PEG/*********双水相和PEG/NaPA双水相体系中的分配情况，实验结果表明，PEG相只含有αLA，但盐相中除含有βLG外，还含有部分αLA。

5、Sivakumar等[7]利用PEG1000/柠檬酸钠双水相体系分离乳清蛋白中的αLA和βLG，在最适条件下，αLA在上相分配系数为16.67，βLG在下相分配系数为0.27。Kalaivani等[8]利用PEG1000/柠檬酸钠双水相体系分离乳清蛋白中的αLA和βLG，通过响应面协同节线长度、pH值、体积比和乳清蛋白浓度等变量的相互作用，优化出最佳提取条件，使上相中αLA的提取率为89%，纯化率为96%，下相中βLG的提取率为96%，纯化率为76%，但此体系对αLA的提取率偏低。　　聚（乙二醇ran**

6、*******）单丁基醚（聚合物）是一种水溶性聚合物，可与合适的盐溶液混合，构成双水相体系。Chen等[9]利用Poly（ethyleneglycolranpropyleneglycol）（EOPOL31）/*********双水相体系结合高效液相色谱法成功分离、富集和测定了牛奶、鸡蛋和虾产品中的环丙沙星（CIP），CIP的萃取率最高可达97.7%。Dembczy��ski等[10]利用************************共聚物（EO50PO50）/*********双水相体系分离溶菌酶，并利

7、用响应面模型计算分配系数K和上相中酶的产率，实验结果与响应面模型计算结果一致。本研究采用聚（乙二醇ran*********）单丁基醚（分子量3900）与*********形成双水相体系，分离WPI中αLA和βLG，通过液相色谱监测，系统地研究了双水相体系的pH值、WPI浓度、NaCl添加量和聚合物与*********体积比对分离效果的影响，优化出最佳提取条件。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂　　1260半制备液相色谱仪，配紫外可见检测器和ChemStation工作站（美国Agilent公司）；SC361

8、0型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；A150011型涡流混匀器（南京佳俊生物有限公司）；FE201EL20型pH计，AL04电子分析天平（梅特勒托利多仪器（上海）有限公司）。　　WPI（上海诺申食品贸易有限公司，蛋白质含量88%±4.5%）；αLA和βLG标准品（美国Sigma公司）；聚（乙二醇ran*********）单丁基醚（Poly（ethyleneglycolranpropyleneglycol）monob