颊癌模型中环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶表达的意义

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1、颊癌模型中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的意义作者：杨朝晖，李劲松，徐静，陈伟良，李海刚【摘要】【目的】研究环氧合酶-2（COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在地鼠颊囊肿瘤发生发展中的表达,探讨两者可能的相关性。【方法】90只金黄地鼠被分成两组：实验组80只，对照组10只，利用二甲基苯并蒽（9,10-dimethyl-1,2-benz-anthracene,DMBA）诱导地鼠颊囊癌变，免疫组化法检测iNOS和COX-2的动态表达。【结果】在16周时所有存活的实验组地鼠颊囊全部发生癌变，iNOS从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为0%，62

2、%，82.14%，有显著性差异;COX-2从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为11.11%，16.67%，56.25%，有显著性差异；iNOS，COX-2存在呈正相关性（γ=0.279，P＜0.05）。【结论】iNOS和COX-2表达在地鼠颊囊鳞癌发展中起重要作用,并呈正相关作用。【关键词】一氧化氮合酶；环氧合酶-2；颊癌；模型恶性肿瘤的发病涉及了多因素多步骤的参与，该过程有多种基因和/或蛋白异常表达，分别或共同地作用于肿瘤的发生发展过程。研究表明，环氧合酶(cyclooxygenase,COX)10和诱导型一氧化氮合酶（induciblenitric

3、oxidesynthase,iNOS）在一些肿瘤如舌鳞癌[1]、肺癌[2]、胃癌[3]、结肠癌[4]中高表达，在组织分布、表达等方面表现很相似，共同参与了一些生理病理过程；在舌鳞癌的转移和转移灶的生长中两者起着十分重要的协同作用[1]。本文研究地鼠颊囊癌模型形成过程中COX-2和iNOS的表达意义，探讨其相互关系。1材料与方法1.1金黄地鼠颊囊癌动物模型的建立及实验分组1.1.1实验动物和试剂采用金黄地鼠（由中山大学实验动物中心提供）90只，普通级，体质量80～100g，6～8周龄，雌雄各半，在空气流通、干燥、恒温25℃、24h光暗循环条件下统一饲养。二甲基苯并蒽（

4、9,10-dimethyl-1,2-benz-anthracene,DMBA）购自SIGMA公司，配成5mg/L的DMBA丙酮液避光保存。1.1.2动物分组按随机数字表将90只地鼠分出10只作为对照组,不做任何处理；剩余80只地鼠分成4组作为实验组，每组20只，用2号水粉画笔沾5mg/LDMBA丙酮液涂布实验组地鼠右侧颊囊黏膜，连续9周，在第6周、第9周、第12周、第16周末分批处死各组地鼠，对照组10只不进行任何处理，在第16周处死。切取地鼠0.5cm×1cm大小颊囊病变组织，用100mL/L甲醛固定4810h，常规石蜡包埋，连续切片厚度约4μm，HE染色后镜检。

5、按WHO口腔癌前病变协作中心上皮异常增生12项诊断标准，双盲法镜检。1.2免疫组化法检测地鼠颊囊黏膜iNOS，COX-2蛋白表达1.2.1试剂和方法兔抗鼠iNOS多克隆抗体，兔抗鼠COX-2多克隆抗体均购自武汉博士德公司产品，按SABC免疫组化操作步骤进行。1.2.2结果判断以已知COX-2和iNOS乳腺癌阳性组织切片为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照，光镜下观察染色结果，阳性反应呈棕黄色或棕褐色颗粒，位于细胞浆，根据阳性细胞所占比例分为0%阴性（-）1%～20%弱阳性（+），21％～50%阳性（++），≥51%强阳性（+++）。1.3统计方法各组iNOS和CO

6、X-2阳性分布用非参数检验，iNOS和COX-2表达的相关性采用Spearman相关性检验，全部统计分析采用SPSS11.0统计软件包，检验水准定为α＝0.05。2结果102.1地鼠颊囊黏膜组织学及光镜检查结果除2只地鼠在13、14周分别死亡外，其余实验地鼠分别在6、9、12、16周处死，各组地鼠颊囊黏膜病理切片在光镜镜检确定为各型上皮异常增生和早期浸润鳞癌出现数目(表1)。2.2iNOS,COX-2免疫组化表达结果iNOS在正常地鼠颊囊黏膜鳞状上皮未见表达，呈阴性；在上皮异常增生期颊囊黏膜有31（62%）例出现阳性表达,细胞浆染色,呈棕黄色，到浸润癌阶段，iNOS

7、阳性率增多，达到23（82.14%）例（图1）；COX-2在10例正常地鼠颊囊黏膜鳞状上皮仅有1例阳性表达，在上皮异常增生颊囊黏膜有8（19.04%）例出现阳性表达，胞浆呈棕黄色，随病变发展，到浸润癌阶段，COX-2阳性有16（57.14%）例（图2）。浸润癌与正常上皮、异常增生iNOS蛋白阳性表达率差异有统计学意义（χ2=15.48，P＜0.05）,浸润癌与正常上皮、异常增生COX-2蛋白表达率差异有统计学意义（χ2=16.63，P＜0.05，表2)。2．3实验组各组iNOS和COX-2表达的相关性实验各组地鼠黏膜iNOS和COX-2表达均为阴性有30例，均为