尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工杂交卵子、精子相关的生物学特性研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120107177上海海洋大学硕士学位论文尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工杂交卵子、题目：精子相关的生物学特性研究Biologicalcharactersrelatedtoeggs,sperms英文题目：inhybridizationofOreochromisniloticus♀×Sarotherodonmelanotheron♂专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：罗明坤指导教师：赵金良教授二0一五年三月二十五日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所

2、取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导

3、教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注吕为群上海海洋大学教授主席崔映宇同济大学副教授委员王成辉上海海洋大学教授委员赵岩上海海洋大学讲师秘书答辩地点水产与生命学院D楼101答辩日期2015年6月9日上海海洋大学硕士学位论文尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工杂交卵子、精子相关的生物学特性研究摘要为培育罗非鱼耐盐养殖新品种，上海海洋大学通过种间杂交方法获得了兼具生长快和耐盐性强的尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）♀×萨罗罗非鱼（Sarotherodonmelanotheron）♂杂交种。然而，该杂交为属间远缘杂交，不能自然繁殖

4、；罗非鱼为非同步性产卵鱼类，且卵子成熟时期不易掌控，难以获得批量成熟卵子进行人工授精，因而，其规模化制种难度大。为此，本论文通过对繁殖期尼罗罗非鱼和萨罗罗非鱼卵子、精子形态发育特征进行观察，比较了几种环境因子对精子活力的影响；以及尼罗罗非鱼卵巢成熟发育过程中性类固醇激素、卵黄蛋白原（Vitellogenin）含量及其mRNA表达变化特征分析，以期为尼萨罗非鱼杂交制种技术完善提供一定的基础资料。繁殖季节，采用挤压亲鱼腹部方法获得了尼罗罗非鱼卵子、萨罗罗非鱼精子。用光学显微镜和解剖镜对各期卵子形态进行观察、拍照，比较分析不同成熟阶段卵子形状、卵径、表面色泽及卵黄颗粒积累特征，结果表明，未成熟卵细胞

5、呈椭圆形，表层布满细长血管；成熟卵细胞似梨形，卵径为0.5～1.6mm，表层有透明卵膜，充满金黄色卵黄颗粒；过成熟卵细胞形状极不规则，卵黄颗粒开始液化。用扫描电I上海海洋大学硕士学位论文镜对萨罗罗非鱼精子外形特征进行观察，正常精子由头部、中片及尾部组成，头部呈长锥状，长径1.82±0.35µm，宽径1.41±0.34µm；中片近圆柱形、较短，长径0.74±0.08µm，宽径0.16±0.06µm；尾部极长，16.42±0.35µm，单鞭毛结构。同时，还观察到短尾、双头、双尾三种异常类型的精子。利用显微镜观察比较不同梯度的pH、盐度、离子以及葡萄糖条件下，萨罗罗非鱼精子活力（精子快速运动、寿命时

6、间及激活率）的变化。结果表明：pH7.5~8.0时，精子激活率最高，达90%；pH7.5时，精子快速运动和寿命时间最长，为66.33±2.25s和933.17±25.79s。盐度25‰~32‰时，精子激活率最高，均达80%；30‰盐度时，精+子快速运动和寿命时间最长，为63.50±2.35s和402.50±7.31s。随K浓度增加，精子激活率和活力逐渐增强，75mmol/L时达峰值，然后2+快速下降。Ca对精子活力起明显的抑制作用，37.8mmol/L时精子2+活力最佳，而后随Ca浓度增高，精子抑制作用和聚集程度明显加重。与离子影响不同，葡萄糖可有效延长精子寿命，150mmol/L时，寿命时间

7、仍为281.00±5.90s；125mmol/L以下时，激活率均为80%。通过组织切片、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法，研究了尼罗罗非鱼卵巢自然成熟发育过程中性类固醇激素（雌二醇E2、孕酮P）、卵黄蛋白原（Vtg）含量及VtgmRNA相对表达水平的变化规律。结果表明，尼罗罗非鱼性腺指数（GSI）与卵巢成熟发育间呈同步性变化，Ⅴ期达到峰值。血清中E2含量自卵巢Ⅱ期开始显著升II上海海洋大学硕士学