细胞因子风暴在流感病毒诱导的急性肺损伤中作用机制的研究

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1、＾京捣和皆净悅中糾《狀博女研究生学位论文Ｗ北京协和医学院研究生院学校代码１００；２３学号；Ｂ２０１２００５０１９博±学位论文细胞因子风暴在流感病毒诱导的急性肺损伤中作用机制的研究所院；基础学院姓名：王伟指导教师：蒋澄宇教授学科专业；生物化学与分子生物学研究方向；呼吸系统疾病的致病机理完成日期；２０１５年４月１５日北京协和医学院基巧学院博±学位论文目录ＳｇＳ５表ｅ录６英文缩略语表７一－１第部分ＩＰ１０

2、在甲型Ｈ１Ｎ流感病毒诱导的急性肺损伤中致病机理的研究１０帖摘要１１Ａｂｓｔｒａｃｔ１２引胃１３—１６＞实验材輯与方法一第节甲型Ｈ１６１Ｎ１流感病毒的培养、收集和浓缩１１．实验材料１６１丄１病毒１６１１６．１．２动物１丄３实验仪器１６１．１．４实验试剂１６１．２１６施１．－２１活歴检査１６１．１２．２鸡胚尿囊腔接种７１．２．３流感病毒的收获１７１．２．４鸡胚尿囊液中流感病毒的粗离１７１．２．５超速离也

3、法浓缩流感病毒１７第二节甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒血凝单位及５０％培养组织感染剂量（ＴＣＩＤ５０）的测定１８２．１实验材料１８２丄１病毒１８２．１．２ＭＢ１８２丄３实验仪器１８２丄４实验试剂１８２１．２方法８〇２．２．１／〇鸡红细胞悬液制备１１８２．ＣＫ细胞的培养１．２２ＭＤ９２．２．３流感病毒的血凝单位测定１９２．２４流０２．感病毒ＴＣＩＤ５的测定０第三节纯合知Ｗ基因敲除小鼠的鉴定２０３．１实验材料２０３丄１实验动物２０

4、３丄２实验仪器２１３丄３实验试剂２１３丄４主要溶液配方２１３丄５ＰＣＲ引物２２．２３方法２２．．Ａ３２１小鼠ＤＮ捣取２２３．２１Ｐ．ＣＲ扩増目的片段２３第四节毎幕因敲除小鼠感染甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒后的相关检测２４１北京协和屋学院基拙学院博±学位论文４．１实验材料２４４．１．１病毒２４４丄２细胞２４４丄３实验动物２４４丄４实验仪器２４４丄５实验试剂２５４丄６主要溶液配方２５４１．４ＰＣＲ引；２．巧光

5、定量物６４．２方法２６４１．２．１检测ＢＪ５０株感染后小鼠的体重变化和死亡率２６４．２．２检测ＢＪ５０１株感染后小鼠肺组织的病理变化２６１２７４．２．３检测ＢＪ５０株感染后小鼠肺组织的湿干比４１．２．４检测ＢＪ５０株感染后小鼠肺组织中的病毒滴度２８－８４．２．５ＲＴＰＣＲ检测ＢＪ５０１株感染后小鼠肺组织中的病毒载量２４．２．５．１小鼠肺组织样品的准备２８．．．４２５２总ＲＮＡ提取２９一．２．４．５３ｃＤＮＡ第链合成３０４．４３０．２．５巧

6、光定量ＰＣＲ检测－第五节ＩＰ１０在甲型Ｈ．．３１１Ｎ１流感病毒感染诱导的小鼠急性肺损伤中相关信号通路的检测５３１．１实验材料５丄１病毒３１５丄２实验动物３２５丄３实验仪器３２５丄４实验试剂３２５．１．５主要溶液祀方３２５丄６使用的主要抗体３４５．２方＆３５５．２．１巧姑基因敲除小鼠感染甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒后的相关检测３５．１５２丄１检测ＢＪ５０株感染后小鼠的体重变化和死亡率３５５．２丄２检测ＢＪ５０１株感染巧小鼠肺组织的病理变化３５５．

7、２丄３检测ＢＪ５０１株感染后小鼠肺组织的湿干比３６ＷｅＩ巧５．２．２ｓｔｅｒｎｏＢ０ｂｌｔ检巧ＪＪ５１株感染巧小鼠肺组织中相关蛋Ａ表达水平的变化５．２．２．Ｉ小鼠肺组织样品的制备ｙｊ．．２．ＢＣＡ５２２蛋白质巧量试剂盆检测蛋白浓度巧５．２＇２．３Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测３８．２．ｅｓｅｒｎ５．２４Ｗｔｂｌｏｔ结果定量分析巧第六节化１０单克隆抗体治疗甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒感染小鼠的相关检测巧６．１《验材料４０６丄１病毒４０６丄２实验动物４０

8、６丄３实验仪器４０６丄４实验试剂４０６．２方＆４０－．．１４０６２检测ＩＰ１０单克降抗俾治疗ＢＪ５０１株感染小鼠的死ｔ華２北京协和医学院基础学院博±学位论文－６．２．２检测ＩＰ０１单克隆抗体治疗ＢＪ５０１株感染小鼠的肺组织的病理变化４１－６．２．３检测ＩＰ１０单克隆抗体治疗ＢＪ５０１株感染小鼠的肺组织的湿千比４２６２４检测－００．．．ＩＰ１单克隆抗体治疗ＢＪ５