华重楼内生菌的分离鉴定与代谢产物研究

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1、■、．—Ｉ－妒．－■■■／Ｖ．；‘－分类号Ｓ６６２．５学号；ｓ２０１２２００３■＊＊？＾四川农业大学？一？／－－—产＊？？Ｊ－－Ｖ．３碱±学位论文‘？，，＊：家Ｖ．＾，华重楼内生菌的分离鉴定与代谢产物研究安文Ｊ＇．－．，＊ｆ？■？？—＜、－指导老师武晓玲副教授、一＊－田孟良教授专业名称作物遗传育种＜■？研究方向中药材巧源与鉴定Ｔ■＾ｆ

2、Ｊ、＞、－Ｖ，Ｊｒ？－ｉ，２０巧年５月■？．．？Ｖ？４叫．＜－／－＼－—－；／．．＾一－Ｉ＇．人一＂■－？？？＾＊＼矿－．，ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉｔｅｄｉ打ａｒｔｉａｌｆｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｒｅｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｐｑＭＡＲＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＩｓｏｌａｔｉｎｇＩｄｅｎｔｉｆｉｎｔｈｅｅｎｄｏｈｔｅｓａｎ

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4、Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研究所做的任何。与我贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：年月日少（Ｔ《少＆关于论文使用授巧的亩明、本人完全了解四川农业大学有关保留使用学位论文的规定，即：学棱有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学

5、可Ｗ巧不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文不保密。□本论文保密，在＿＿年解密后适用本授权。‘‘’’（请在Ｗ上□内划Ｖ）研巧生签名；年＾月ｆｅ／导师签名：心化年／月曰摘要’＇’＇５７０＼／１３１．￡：細６？５华重楼（＆？７瓜１５仍０？６／｜）为延龄草科（１：１＾１帖０６＆６）重楼属植／如妙一物，是种多年生草本名贵中药，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊等功效，主要用于斤疮痴肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌朴伤痛，惊风抽搖等病症，被《中国药典》（２０１０年版）收录。现

6、代药理研巧表明，重楼具有止血止痛、抗菌抗癌、巧淡镇静，因此成为了云南白药、抗病毒颗粒、宫血宁胶囊等多种中成药的主要成分。８－１０然而由于重楼自然生长缓慢，从种子萌发到成熟收获需要年的时间，加之人工种植技术尚未成熟，暂时还没有大规模的开发和利用，重楼生物量整体上面临着短缺，；更由于市场需求的巨大利益诱惑大量的野生资源被农户采挖，让野生重楼资源日渐枯竭。所Ｗ寻找重楼的替代品和开发人工种植技术成为了目前研究的重点和热点。参考国内外的研究文献，植物内生菌能够产出与宿主相同或者相似的具有一定生理活性的次

7、级代谢产物，而从菌类中提取有用的代谢产物是进行工厂化规模化生产的最好途径。本文四川巧蛛山脉的华重楼内生菌为研巧材料，寻找可レ乂产生留体皂巧或者类似物的菌种，首先从实验室的层面发现和解决重楼资源不足的问题。从四川都江堪市、宝兴县、雨城区、名山县、夫全县采集新鮮的人工栽培华重楼，利用组织切块法进行内生真茜和内生细菌的分离、纯化和鉴定。共分离内生真菌８３株，纯化巧株，ＩＴＳ分子鉴定出２６株，分为７个属；分离内生细菌１０１株，纯化４８株，１６ＳｒＤＮＡ分子鉴定出３５株，分为１６个属。对内生菌的进行发

8、酵液超声波破碎、萃取、旋转蒸发后ＨＰＬＣ检测，同重楼皂昔Ｉ、ＩＩ、ＶＩ、Ｗ及墓賴皂昔———ＭＳ—元的标准品色谱图进斤比对，发现４株真菌（ＤＪＹ１０、ＤＪＹ７、９、ＢＸ１５）——３Ｓ—和３株细茵（ＢＸ９、ＹＣ、Ｍ６）至少有１个和标准品出峰时间相近，其中ＤＪＹ—７——１５——、ＭＳ９、ＢＸ、ＹＣ３和重楼皂