肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌转移中的作用及其相关机制的研究

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1、後里大学万方数据博士学位论文肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌转移中的作用及其相关机制的研究谨以此文献给恩师吴灵先生及给予关心、支持和帮助的各界朋友／——丁景弦院系：肿瘤医院专业：肿瘤学姓名：丁景弦指导教师：导师组成员：完成日期：吴炅教授邵志敏教授金伟教授陈灿铭教授侯意枫教授胡震教授2013年4月15日目录㈣㈣万方数据主要缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．：．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．I万方数据肿瘤相关巨噬细胞复旦大学博士论文缩略词TAMSPEGFACSBCSCPMAEMTM．CSFGM．CSFIL．6ERPRFBSDM

2、SONOD／SCIDPIBSAPBSTMESCNAs203PCRIU乙PCRGAPDHHI强DCISIDC主要缩略词表英文全称tumor-associatedmacrophagespolyethyleneglycolfluorescence．activatedcellsorterbreastcancerstemcellphorbol12·-myristate13·-acetateepithelial-mesenchymaltransitionmacrophage-colonystimulatingfactor中文全称聚乙二

3、醇流式细胞分选仪乳腺癌干细胞(12-)十四酸佛波酯(一13-)乙酸盐上皮间质转化巨噬细胞集落刺激因子granulocyte．macrophage．colony粒-巨噬细胞集落刺激因子stimulatingfactorinterleukin6estrogenreceptorprogesteronereceptorfetalBovineSerumdimethylsulfoxidenon．obesediabetic／severecombinedimmunodeficientpropidiumIodidebovineserumal

4、buminphosphatebuffersalinetumormicroenvironmentstemcellnichearsenictrioxidepolymerasechainreactionreversetranscription-PCRglyceraldehyde··3·-phosphatedehydrogenasehorseradishperoxidaseductalcarcinomainsituinvasiveductalcarcinoma白介素6雌激素受体孕激素受体胎牛写清二甲亚砜非肥胖型糖尿病／严重联合免疫

5、缺陷碘化丙锭小牛血清蛋白磷酸盐缓冲液肿瘤微环境干细胞微环境三氧化二砷聚合酶链反应逆转录．PCR甘油醛．3．磷酸脱氢酶辣根过氧化物酶导管原位癌浸润性导管癌万方数据肿瘤相关巨噬细胞复旦大学博士论文肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌转移中的作用及其相关机制中文摘要研究背景及目的：随着人口老龄化，恶性肿瘤的发病率随之升高。乳腺癌曾经是欧美发达国家女性最常见的恶性肿瘤之一，随着生活方式的西化，我国乳腺癌的发病率呈现上升趋势，这在沿海发达城市表现尤为明显。乳腺癌患者的总体预后相对其他恶性肿瘤较好，然而，一旦发生转移，5年生存率明显降低。肿瘤相关

6、巨噬细胞是由单核细胞在肿瘤细胞诱导下分化形成的，通常具有M2型巨噬细胞表型。研究表明，肿瘤相关巨噬细胞浸润在乳腺癌组织中较为常见，并且其丰度分布与预后不良相关，具体机制不详。本研究旨在探讨肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌干细胞维系及其与乳腺癌转移的关系，并在此基础上，进一步研究乳腺癌细胞对单核细胞定向分化的调节及其干预措施。方法：首先，通过分层随机化收集复旦大学附属肿瘤医院2008年1月至2010年5月乳腺癌组织标本120例，采用免疫组化技术分析M2型肿瘤相关巨噬细胞标记CDl63在乳腺癌中的表达分布。通过向培养基中加入巨噬细胞集

7、落刺激因子(M．CSF)人为诱导单核细胞株U937分化为M2型巨噬细胞，采用镜下观察形态、RT-PCR及定量RT-PCR鉴定其表型。分别用不同活细胞染料(CMTMR，CⅧDA)标记经诱导分化的U937细胞及乳腺癌细胞，利用体外促融合技术(聚乙二醇，PEG1450)辅助他们融合，通过流式细胞仪(FACS)分选融合形成的杂交细胞。通过体内外实验比较融合细胞与其来源乳腺癌细胞相关生物学行为的差异。其次，通过乳腺癌细胞与U937细胞共培养技术比较不同雌激素受体(ER)状态乳腺癌细胞诱导单核细胞分化能力的差异。为此，我fi'JN用慢

8、病毒载体系统药物筛选了分别带GFP．PURO和RFP-NEO标记的U937细胞及乳腺癌细胞稳定表达株，模拟单核细胞向肿瘤组织浸润的体内过程，研究不同乳腺癌细胞诱导单核细胞趋化迁移及侵袭能力。采用Bio．Plexmultiplexhumancytokine试剂盒检测了不同ER状态的乳腺癌细胞株单核细胞分化