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1、第26卷增刊广西农业生物科学2007年6月Vol.26,Sup.JournalofGuangxiAgric.andBiol.ScienceJune,2007文章编号:1008-3464(2007)增-0007-05G418抗性筛选标记在板栗疫病菌中的应用111111,2,3蓝秀万,陈敏玫,桂磊,范云燕,甘文剑,陈保善(1广西大学生命科学与技术学院;2广西亚热带生物资源保护利用重点实验室;3微生物及植物遗传工程教育部重点实验室,广西南宁530005)摘要:板栗疫病菌-低毒病毒系统,是一个优良的研究植物病
2、原真菌致病和病毒-宿主相互作用分子机制的模型。随着研究的深入,原有的苯菌灵和潮霉素两个遗传转化筛选标记已不能满足研究需要。文章报道构建一个由构巢曲霉trpC启动子驱动的G418抗性Neo基因盒,并成功应用于板栗疫病菌的遗传转化研究。关键词:板栗疫病菌;G418抗性;遗传转化中图分类号:Q782文献标识码:AG418-resistanceasadominantselectablemarkerinCryphonectriaparasitica111111,2,3LANXiu-wan,CHENMin-mei,
3、GUILei,FANYun-yan,GANWen-jian,CHENBaoshan(1CollegeofLifeScienceandTechnology;2GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourceConservationandUtilization;3TheKeyLaboratoryofMinistryofEducationforMicrobialandPlantGeneticEngineering,GuangxiUniversity,Nanning530
4、005,China)Abstract:Hypovirus/Cryphonectriaparasiticaisanexcellentexperimentalsystemtostudytheregulationoffungalvirulenceandvirus-hostinteraction.AlthoughconsiderableprogressinmoleculargeneticsofC.parasiticahasbeenmadeduringthepastyears,thereisstillanurge
5、ntneedforefficientselectablenewmarkersformultiplegeneknockouts.Inthisstudy,wedevelopedanewNeoexpressioncassetteunderthecontroloftheAspergillusnidulanstrpCpromoterandthatserveasadominantdrug-resistancemarkerforC.parasitica.Keywords:Cryphonectriaparasitica
6、;G418resistance;genetictransformation[1]板栗疫病菌(Cryphonectriaparasitica)是引起板栗疫病的病原真菌,dsRNA低毒病毒(hypovirus)是一类寄生在板栗疫病菌中的无衣壳dsRNA病毒。dsRNA低毒病毒不仅导致宿主致病力[2-4]减弱,还导致菌落色素分泌和分生孢子产生量减少等症状。鉴于板栗树以及板栗疫病菌与dsRNA低毒病毒相互作用的特性,板栗疫病菌/低毒病毒已作为一种模式生物系统,广泛应用于植物病原真菌致[5-7]病机制和病毒-宿主
7、相互作用分子机制研究。迄今已知的低毒病毒有4种,其中CHV1研究最深入,[8-10]已有3个具有不同生物学性状的株系全序列被测定,并且成功地获得了侵染性克隆,一些病毒基因[8-13]的功能得到部分阐明。对板栗疫病菌本身的分子生物学的研究在过去十几年也有一定的进展,如克收稿日期:2007-04-20;修回日期:2007-05-24。基金项目:国家自然科学基金重点项目(30130020);国家杰出青年科学基金(39925003);教育部高校骨干教师资助计划(2000);广西自然科学基金(桂自科022900
8、1)。作者简介:蓝秀万(1970-),男,江西永丰人,讲师,博士研究生,现在广西医科大学工作。通讯作者:陈保善,教授,博士生导师;E-mail:chenyaoj@gxu.edu.cn。8广西农业生物科学第26卷[14]隆了G蛋白信号途径的关键基因G蛋白亚基和亚基,MAPK途径的几个重要基因cpmk1,[15][16]cpmk2和Ste12等,病毒感染抑制了这些基因的表达。敲除这些基因均影响真菌的致病性,从而揭示低毒病毒导致真菌低毒性有可
