wnt3a对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的研究

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1、中图分类号：学校代码：10055密级：公开蠢盐犬法博士学位论文Wnt3a对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的研究TheresearchofinfluencesOilWnt3atothechondrogenesisof论文作者些峰学科专业皇b抖堂BMSCs培养单位医堂瞳答辩委员会主席趁墓羞评阅人熬墓菱金苤阎奎国王毯丞圈4董垫堕南开大学研究生院二。一三年五月南开大学学位论文使用授权书根据《南开大学关于研究生学位论文收藏和利用管理办法》，我校的博士、硕士学位获得者均须向南开大学提交本人的学位论文纸质本及相应电子版。本人完全了解南开大学有关研究生学位

2、论文收藏和利用的管理规定。南开大学拥有在《著作权法》规定范围内的学位论文使用权，即：(1)学位获得者必须按规定提交学位论文(包括纸质印刷本及电子版)，学校可以采用影印、缩印或其他复制手段保存研究生学位论文，并编入《南开大学博硕士学位论文全文数据库》；(2)为教学和科研目的，学校可以将公开的学位论文作为资料在图书馆等场所提供校内师生阅读，在校园网上提供论文目录检索、文摘以及论文全文浏览、下载等免费信息服务；(3)根据教育部有关规定，南开大学向教育部指定单位提交公开的学位论文；(4)学位论文作者授权学校向中国科技信息研究所及其万方数据电子出版社

3、和中国学术期刊(光盘)电子出版社提交规定范围的学位论文及其电子版并收入相应学位论文数据库，通过其相关网站对外进行信息服务。同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。非公开学位论文，保密期限内不向外提交和提供服务，解密后提交和服务同公开论文。论文电子舨提交至校图书馆网站：http：／／202。113。20．161：8001／index．htm。本人承诺：本人的学位论文是在南开人学学习期问创作完成的作品，并已通过论文答辩；提交的学位论文电子版与纸质本论文的内容一致，如因不同造成不良后果由本人自负。本人同意遵守上述规定。本授权书签署一式两份，由研究生

4、院和图书馆留存。作者暨授权人签字：曲蝰2013年5月21日南开大学研究生学位论文作者信息论文题目Wnt3a对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的研究姓名曲峰学号1120100389答辩日期2013年5月21日论文类别博士一学历硕士口硕士专业学位口高校教师口同等学力硕十口院／系／所医学院专业外科学联系电话13466682369Emailqfortho@163．corn．‘通信地址(邮编)：北京市海淀区复兴路28号解放军总医院外科楼骨科六病区备注：是否批准为非公开论文否注：本授权书适用我校授予的所有博士、硕士的学位论文。由作者填写(一式两份)签字后

5、交校图书馆，非公开学位论文须附《南开大学研究生申请非公开学位论文审批表》。南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公丌发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：酋蝰2013年5月21日非公开学位论文标注说明(本页表中填写内容须打印)根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师

6、同意、作者本人申请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明为空白。论文题目申请密级口限$0(42年)口秘密(≤10年)口机密(420年)保密期限20年月日至20年月日审批表编号批准日期20年，月日南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效)注：限制★2年(可少于2年)：秘密★10年(可少于10年)；机密★20年(可少于20年)中文摘要目的：观测Wnt3a过表达后骨髓问充质干细胞(BMSCs)成软骨能力的变化，以及Wnt3a影响BMSCs增殖、分化的相关机制。方法：通过慢病毒在大鼠BMSCs中分别导入Wnt3a基因和

7、Mock(阴性无功能基因片段)基因；使用荧光显影及WesternBlot对导入效果进行鉴定。MTT法分析Wnt3a对BMSCs增殖的作用，进而甲苯胺蓝染色检测基质蛋白聚糖的生成情况，并使用实时荧光定量PCR检测软骨分化标志基因COL2A1、Aggrecan和SOX9的mRNA水平。通过观测[3-catenin、cE+、磷酸化CaMKII等蛋白与离子的变化判断Wnt3a影响BMSCs软骨分化的途径，并使用DKKl和KN93分别抑制经典及非经典途径，以分析各途径在Wnt3a影响BMSCs增殖、分化过程中的作用。结果：所有BMSCs经慢病毒感染后

8、用荧光显微镜可观察到绿色荧光蛋白表达；WesternBlot发现Wnt3a转染BMSCs后，其基因能够表达。MTT分析显示过表达Wnt3a的BMSCs增殖率显著高于对照组(P