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时间:2019-02-26
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1、培养基名称:营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基) 品种编号:022020 培养基英译名称:NutrientAgar 培养基规格:250g 营养琼脂(用途:用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定。 营养琼脂使用原理: 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。 配方(每升): 蛋白胨10g 牛肉膏粉3g 氯化钠5g 琼脂15g 最终pH7.3±0.2 营养琼脂(使用方法: 1、称取营养琼脂(33g,加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭
2、菌15min,备用。 2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠),充分振摇,即为1:10的均匀稀释液。依次做1:100,1:1000……稀释液。 3、根据对样品污染情况的估计,选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。 4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后,倒置于36±1℃温
3、箱中培养48±2h。 5、观察结果。 6、菌落计数方法: 做平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在计下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 7、菌落计数的报告: 选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,
4、可视为一个菌落;如有不同来源的几条链,则应将每条链视为一个菌落计 A:稀释度的选择: 应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。 若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30—300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字。 若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最底稀释倍数报告之。 若有稀释度的平均菌菌落
5、数均不在30—300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 菌落数的报告: 菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位数字后面的有效数值,以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数,也可以用10的指数来表示。 稀释度选择及菌落数报告方式 例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数个/g或mL报告方式个/g或mL 10-110-210-3 1多不可计16420——1640016000或1.6×104 2多不可计295461.63775038000或3.8×104 3多
6、不可计271602.2——2710027000或2.7×104 4多不可计多不可计313——31300310000或3.1×105 527115——270270或2.7×102 6000——<1×10<10 7多不可计30512——3050031000或3.1×104 质量控制: 本品接种下列菌株,置于36±1℃温箱中培养48±2h,结果如下: 菌名 菌号 生长状况 菌落特征 大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好 白色—灰白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,湿润。 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黄色
7、,圆形,边缘整齐,表面光滑、湿润,不透明。 营养琼脂贮存方法:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
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