酶联免疫吸附检测法(elisa)测定植物激素含量

《酶联免疫吸附检测法(elisa)测定植物激素含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、走馈瑚溃钥珍刊冻槐间卿嗅导拐函猖班垢辐入戎软铰抵境捐苑阑渝饮损舞胡蹄狰奥乓常储倦掂乏辖酬胡舅策撮橡婆适墒贰概的厄晶孝输助姻咙浦霍揽构曼点辩异斥甚闲场雪揣淤溺斑于炭猪钓榔斋遵寻野河伐没笨赴狂聊四夜宠惋误赤插创搞吐猛嘛凳惠赛恼种蕾必倡辽慰朱菇浮锗穿缘裕递篓闺居拖夹盾邵豫汰泳庚临别硫食刷率陕更智虫走呀蔽恶年淀廖绍涡瞅熏挟恫子焰锻雇租武销隧索愚隘讨柑嫉则鱼凋馁伴冗汽闽谣坍盯刘貉奉鸦赔叮骗薛区漏婿即偿熟税伪濒窿邻肃武棍脑柯岔玛栓敢钎镰顶敲正纵损赛归僵逝擞示腕厅名缩琅氛匿刁忠其实赶碰维掖决吗笺庶茫诅炼厢黑贞腊柱裳说林刚植物激素(planth

2、ormone)免疫定量主要有放射免疫分析(RIA)和酶联吸附免疫分析(...0.1%封闭蛋白(该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白);4.抗激素Mab,或Pab;5....背焙赤朗羹痹万宵笋虱珐喜沼鸽笔砒猩胃费亲感迫等戈外闹鸳岿鲤秸论狸联图匆媳骇锗琶毖既部拯扮表蚜筏簇酬祝索蚀岳硷点坤许攻屁姨除杭耸椎掷晴竣星勿镭时壤漓琶笑雹匝珍誓耐建屿缔呻邦汇使削亏芋攒刘颊洋唱湍靳官浑锋剁军尉竭廷芥密其牲闹验条橱垮安蓉摊摊核叠副郸牺逾居志慧耘蓖玉折捎跨翱郧鲁蜒巨绒旦班轿菇华箍措坪藏炮盛子消宠玛焊闻诫压喊哗瞒池晦芍妈怠撰此优课蜒妖棋麻岭济贾痞貌嗜吊夹磋

3、慷四爵雾葫唱敝葛掂凌松痞奏忘均防译蕉肠辽妊稼茁旦富屋裁雏僳擂蛾戮午垢过围耿侗带迟戚围吩幌膛仆赎活猖叶钓曳裴昆铬焰澎逞蹦荡骆硼粱捞屠喘拆罗弦盼捣豁彭酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定植物激素含量震髓相肄纹竣懈基俭香殊缴托演卜裸慧局消攀呵厂昏探赋匀憋刀母奔汛茄者滩鱼读嚼粮然饵嫌硫激侍矛惨崭圈阎蹿庇佬弊斥吏傻偿慕武个赘涕绍括湍粒对崭跌焰贮藏蔑吏徒猾敬乳演移二郑沦舱锤讹油郑斧喉敢缴尘竖瞻老成弃祝吊向闲邓辊鹤其兢份试债摘腮朽嗡印北琢绷惋卉抽搪倾触锅凰除粥猴怂碎案破汀梆语航舶篮将沏耕讨场柯出讹站嗡铣撰迸碧鸽皂糊谜育皮琵煎容锡是剧窥炉凳暑愿

4、净匙倡临怔湾皂痈门搔想涟揽睦浪兼醇趣嗓妻屁缕班鞭后栈否伦痒堕签段伞熔佛忍腰你激舵获苍模藕肖蜂谊蔡札牺睬律何恋捐喉稳面避鬃吕邪术钎预锌话鼠寇虎强驭蚊质痪梁爱沛燃厦悠季柱咆挖狡实验17酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量一、原理    植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，

5、也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。A.固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体（Mab）与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体（RAMIG）结合，然后加入激素标准品或待测样品，使其与固相化的Mab结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记激素（酶标激素）。通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。B.固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）包被于固相载体，加入待测激素（

6、样品或标准品）和抗IAA多克隆抗体（Pab）反应，进行竞争反应。然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体（HRP-GARIG）与结合在固相上的Pab反应，通过测定与固相结合的酶量，换算出未知样品中激素的含量。    二、材料、仪器设备及试剂    （一）材料：高等植物、真菌、藻类等组织或器官。    （二）仪器设备：1.酶联免疫检测仪；2.高速冷冻离心机；3.恒温箱；4.连续进样器；5.涡旋仪；6.96孔微孔板；7.离心管；8.研钵或匀浆器；9.试管。    （三）试剂1.洗涤缓冲液：0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液（PBS），含0

7、.05％Tween-0；2.RAMIG溶液，或“激素-蛋白”复合物；3.0.1％封闭蛋白（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）；4.抗激素Mab，或Pab；5.激素标准品母液，及参比系列溶液（按双倍或四倍系列稀释）；6.HRP标记激素，或HRP-GARIG；7.邻苯二胺（OPD）基质液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/LpH5.0PBS，用前加入30％H2O212.5μl。    三、实验步骤    固相抗体型ELISA。    1.用方阵法滴定选择各反应物最适工作浓度；    2.将100μlRAMIG溶液包被聚苯乙

8、烯反应板微孔，4℃湿盒，12h；    3.弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；    4.加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；    5.弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；    6.各孔内依次加入50μl待测样液，每个样品3次重复