stoml-2在宫颈癌中的表达及其功能研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文STOML．2在宫颈癌中的表达及其功能研究ExploreTheExpressionandFunctionofStomatin--likeProtein2(STOML．2)inCervicalCancer课题来源：自选课题专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员肿瘤学邓欢梁卫江教授宋立兵教授陈龙华教授李金瀚教授李宇红教授宋立兵教授张文清教授论文评阅人宋立兵教授廖旺军教授2012年5月7日广州硕士学位论文fIIIIIIIIlflllllllIY2257248STO

2、ML．2在宫颈癌中的表达及其功能研究硕士研究生：邓欢指导教师：梁卫江、宋立兵教授摘要背景宫颈癌是世界范围内女性最常见的第三大肿瘤，在我国宫颈癌居女性生殖道恶性肿瘤的首位。在过去的几十年中，尽管影像学技术、外科手术、化疗和放疗取得了很大的进步，但是对于复发转移癌的病人治疗效果依然不尽人意。因此急切需要找到有意义的分子标志，为宫颈癌的诊断治疗措施开辟新的途径。STOML．2是新近发现的stomatin家族的一员，在多种恶性肿瘤中高表达，对恶性肿瘤的作用尚不明确。对其功能研究不多，尚处于初步研究阶段，有限的研究表

3、明STOML．2具有稳定线粒体膜、参与线粒体融合、调节线粒体离子通道的功能。目的分析STOML．2在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系，探讨STOML．2在宫颈癌中的生物学功能。材料和方法1．细胞培养宫颈痛细胞株HeLa、SiHa、C33A、Caski、Hcc94，由中山大学肿瘤医院实验研究部631室保存，用加入了10％FBS(Hyclone)的DMEM或1640(Gibco)培养。中文摘要2．组织标本收集中山大学肿瘤医院1999年"2005年的宫颈癌标本300例、10例正常宫颈组织标本以及19例

4、宫颈癌患者的新鲜手术标本，包括癌组织及对应的癌旁组织。3．1it．PCR和Westernblot在转录和翻译水平检测STOML．2的表达。4．免疫组化采用免疫组化(LSAB)的方法检测300例宫颈癌组织、10例正常宫颈组织的表达及19例宫颈癌患者癌组织和对应癌旁组织的表达。5．siRNA的设计应用siRNA设计软件初筛出9对siRNA，再通过BLAST分析剔除与其他编码基因有同源性的siRNA，最后经RNA结构分析软件分析将对应的基因序列位于二级结构的siRNA去掉，选出三条对靶向STOML．2的siRNA

5、。6．瞬时转染宫颈癌HeLa、HCC94细胞采用脂质体转染技术将STOML．2．siRNA转染HeLa、HCC94细胞，转染48小时后进行相应检测。7．Western．blot检测干扰后STOML-2的蛋白表达水平8．AnnexinV．FITC／PI、TUNEL法检测细胞凋亡情况9．统计学方法采用SPSSl3．0软件进行分析，计量资料以均数4-标准差(x士s)表示。STOML．2在宫颈癌组织中的表达及STOML．2与宫颈癌癌各临床病理因素的相互关系采用#检验。采用Logistic回归模型分析盆腔淋巴结转移的

6、危险因素。采用Kaplan-Meier法，Log-Rank检验比较生存曲线的差异。采用Cox比例风险模型分析影响生存预后的因素。采用独立样本t检验比较凋亡实验各组间差异。各检验过程均以P<0．05(x2t典J检验)认为差异有统计学意义。Ⅱ硕士学位论文结果1．STOML．2在宫颈癌细胞株中高表达宫颈痛细胞株HeLa、SiHa、C33A、Caski、Hcc94中STOML．2在转录和翻译水平表达高于正常对照组织。2．STOML．2在宫颈癌组织中高表达在19对宫颈癌病人组织中，癌组织的STOML．2在转录和翻译水

7、平都比对应的癌旁组织表达高，比值都在2倍以上。3．STOML-2在宫颈癌中高表达且与SCCA、深肌层浸润、淋巴脉管浸润、盆腔淋巴结转移相关，是独立的预后因子。SCCA与STOML-2是盆腔淋巴结转移的高危因素。STOML．2的高表达与宫颈癌的SCCA(#=9．014，P=0．003)、深肌层浸润

8、病理分类、病理分级、宫旁浸润无显著相关性。Logistic回归模型多因素分析显示治疗前SCCAg-->1．5ngml(P<0．001，OR=5．361)、STOML．2表达(P