杂色曲霉素引起hep g2细胞dna链断裂的氧化应激以及溶酶体膜通秀机制的研究

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1、杂色曲霉素引起HepG2细胞DNA链断裂的氧化应激以及溶酶体膜通透机制的研究计：学位论文：32页表格：3个插图：7幅高伟指导教师：刘晓芳副教授申请学位级别：硕士学位专业名称：劳动卫生与环境卫生论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大

2、连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：盖监乙年一[月丛日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOBO6⋯⋯OOOOOD0⋯⋯⋯9(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32

4、杂色曲霉素引起HepG2细胞DNA链断裂的氧化应激以及溶酶体膜通透机制的研究硕士生姓名：高伟指导教师：刘晓芳副教授专业名称：劳动卫生与环境卫生摘要目的：研究ST诱导的DNA损伤与细胞内溶酶体膜稳定性以及ROS水平的关系，旨在探讨ST遗传毒性的机制。方法：实验体系选定HepG2细胞，为了评价ST的遗传毒性，首先通过利用单细胞凝胶电泳(SCGE)实验(彗星实验)来检测HepG2细胞DNA的损伤状况。为了进一步研究ST遗传毒性发生的途径，我们检测了细胞中ROS的水平，通过2’，7’一二氢二氯荧光素(DCFH)法来完成，

5、用荧光色素吖啶橙(Acridineorange，AO)测定细胞内溶酶体膜的稳定性，用免疫组化技术分析ST诱导DNA中产生的8羟基脱氧鸟苷(8-OHdO)的水平；同时，分别采用氯化铵(NH4CL)和N一乙酰半胱氨酸(N—Acetylcysteine,NAC)干预ST所导致的DNA损伤。应用SPSSvl1．5统计软件包对实验结果进行统计分析。结果：HepG2细胞在经过0．5～21．tg／ml的ST染毒处理lh后，细胞溶酶体膜稳定性发生改变，通透性增加，细胞内ROS水平增加，8-OHdG表达水平增加，DNA链发生断裂，

6、细胞形成拖尾，呈彗星样，且其尾长同对照组相比增长明显并且呈剂量依赖关系。与此同时，分别用10mM的NH4CL和NAC对HepG2细胞进行lh的预处理后，ST所引起的DNA损伤链断裂几乎完全被抑制。溶酶体内部的酸性环境维持了溶酶体膜的稳定性，经10mM的NH4CL预处理降低了细胞内的PH值后，ST所引起的HepG2细胞溶酶体膜稳定性得到很好的保护：NAC是已知有效的抗氧化剂，在经过10mM的NAC预处理lh的干预试验后，明显降低了细胞内ROS产生的水平。结论：杂色曲霉素会导致HepG2细胞DNA链发生断裂，对DNA

7、造成损伤，具有DNA损伤毒性。其作用机制可能与溶酶体途径以及氧化应激途径有关。在ST的毒性作用下，溶酶体膜稳定性遭到破坏，从而释放一些酸性水解酶，导致DNA链断裂；ST也可能通过引起HepG2细胞发生氧化应激，导致细胞内ROS水平升高，DNA氧化损伤标志物8-OHdG表达增强，从而对DNA造成氧化性损伤。此外，NAC作为一种有效的抗氧化剂，减轻了ST对HepG2细胞所致的DNA链断裂，说明ST所引起的DNA损伤也可能是氧化性的损伤。关键词：杂色曲霉素DNA链断裂溶酶体膜稳定性ROS2Sterigmatocysti

8、ninducedDNAdamagerelatedtooxidativestressandlysosomalmembranedestabilizationinhumanHepG2cellsMasterdegreecandidate：WeiGaoSupervisor：ProfessorXiao-fangLiuMajor：OccupationalandEvironmentalH