月季再生体系的建立和遗传转化初步研究

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1、华中农业大学硕士学位论文月季再生体系的建立和遗传转化初步研究姓名：孟令宁申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：唐开学201206月季再生体系的建立和遗传转化初步研究摘要月季(Rosahybrida)是世界上最重要的观赏花卉之一，因其美丽的花色、花形，浓郁的芳香和美丽的姿态，四季不断开花和其特有的情感内涵而倍受人们的喜爱。月季的生态适应性比较强，是城市绿化的重要材料，并且在我国各地广泛栽培。近年来，月季育种中存在着诸如遗传背景相对狭窄，传统杂交育种方法周期过长，染色体倍数和倍性差异造成远缘杂交不亲和且杂种高度不

2、育等问题，使生物技术的发展为月季品种的改良提供了新的途径，它可以在保持品种的其他性状相对稳定的基础上，只改变外源基因所控制的性状，还能够利用其他生物的基因，这大大加速了月季育种的进程和效率。本试验以野生种大花香水月季(Rosaodoratavargigantea)、古老月季品种‘月月粉’(Rosachinensis‘PaUida’)和现代月季品种“蜜糖”的单芽茎段为外植体，通过研究影响月季离体再生的各种因素，建立了3种月季的离体培养体系。对影响愈伤诱导和分化的各种因素进行研究，通过间接器官发生途径建立了大花香水月季和‘月月

3、粉’的植株再生体系，并对以月季愈伤组织为受体的遗传转化体系进行了初步探讨。本研究的主要结果如下：1．建立了大花香水月季、‘月月粉’和‘蜜糖’的离体培养体系：大花香水月季和‘月月粉’腋芽萌发最适培养基为MS+6一BA1．5mg／L+NAA0．12mg／L；‘蜜糖’腋芽萌发最适培养基为MS+6．BA1．0mg／L+NAA0．1mg／L；大花香水月季幼苗增殖最适培养基为MS+6-BA1．0mg／L+NAAO．01mg／L+GA30．3mg／L，．‘月月粉’幼苗增殖最适培养基为MS+6．BA1．0mg／L+NAA0．01mg／L+

4、GA30．2mg／L，‘蜜糖’幼苗增殖最适培养基为MS+6．BA1．0mg／L+NAA0．01mg／L+GA30．3mg／L，3种月季材料无菌苗的最适生根培养基为1／2MS+NAA0．15mg／L，经过驯化炼苗，3种月季材料露地移栽成活率均可达80％以上。2．以3种月季的无菌苗小叶片为外植体，筛选出愈伤组织诱导的最适培养基。大花香水诱导愈伤组织的最适培养基为MS+2，4一D4．0mg／L，诱导率为93．33％；‘月月粉’诱导愈伤组织的最适培养基为MS+2，4．D3．0mg／L，诱导率为94．16％；‘蜜糖’在MS+2，4．

5、D4．0mg／L和MS+2，4．D5．0mg／L的培养基上诱导率均可达100％，并且生长状态良好。3．愈伤组织的分化受培养基、培养条件和培养基添加物等多种因素的综合作用。通过间接器官再生途径建立了大花香水月季和‘月月粉’的植株再生体系，大花香水月季愈伤组织在MS+TDZ3．0mg／L+GA31．0mg／L+NAA0．1mg／L培养基上，暗培养15d，可分化形成不定芽，分化率为18％，转移到幼苗增殖培养基上，可形成再生植株。在MS+TDZ8．0mg／L+NAA0．1mg／L培养基上暗培养15天，培养2个华中农业大学2012届

6、硕士研究生学位论文月后转入MS+TDZ3．0mg／L+6．BA1．0mg／L+GA31．0mg／L+NAA0．1mg／L愈伤组织分化形成体细胞胚状体，分化率为13．33％。‘月月粉’愈伤组织在MS+TDZ2．0mg／L+6-B1．0mg／L+GA31．0mg／L+NAA0．1mg／L培养基上，暗培养10d分化形成不定芽，分化率为18．67％，转移到幼苗增殖培养基上，可形成再生植株。在MS+TDZ3．0mg／L+6一BA1．0mg／L+GA31．0mg／L+NAA0．1mg／L培养基上，暗培养15d，愈伤组织分化形成体细胞胚

7、状体，分化率为10．67％。‘蜜糖’在MS+TDZ4．0mg／L培养基上暗培养10d形成胚性愈伤组织，诱导率为20％。4．初步建立了以愈伤组织为转化受体的根癌农杆菌遗传转化体系，研究此转化体系的最佳实验参数。结果表明，大花香水月季愈伤组织侵染25min后，共培养4d，GUS瞬时表达率最高，为87．5％；‘月月粉’愈伤组织侵染15min后，共培养5d，GUS瞬时表达率最高，为55．94％；‘蜜糖’愈伤组织侵染15min后，共培养4d，GUS瞬时表达率最高，为63．34％。关键词：月季；不定芽；愈伤组织：器官发生：植株再生；转

8、化；根癌农杆菌2月季再生体系的建立和遗传转化初步研究AbstractRose(RosahybndaL．)isonekindofthemostimportantornamentalplants，whichispopularbecauseofitsbeautifulcolor,shapeandfull-bo