hpv16型e7与emt之间关系的研究

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1、分类号学号M200975839学校代码分10487类号密级学号M200975839学校代码10487密级硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文硕士学位论文HPV16型E7与EMT之间关系的研究HPV16型E7与EMT之间关系的研究学位申请人：杨润峰学位申请人：杨润峰学科专业：妇产科学学科专业：妇产科学指导教师：王世宣教授指导教师：王世宣教授答辩日期：2012年5月答辩日期：2012年5月AdissertationsubmittedtoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofM

2、asterofMedicineTheresearchofrelationshipbetweenE7ofHPV16typeandEMTM.Candidate:YangRunfengMajor:Obstetrics﹠GynecologySupervisor:Prof.WangShixuanHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan，430074，P.R.ChinaMay,2012独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写

3、过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日

4、目录第一部分HPV16型E7与EMT之间关系的研究一．中文摘要……………………………………………………………………………1二．英文摘要……………………………………………………………………………3三．研究背景……………………………………………………………………………5四．在宫颈癌细胞系中研究E7与EMT之间的关系1.材料与方法………………………………………………………………………52.结果……………………………………………………………………………20五．讨论………………………………………………………………………………24六．参考文献…………………………………………………………………………2

5、5第二部分综述：上皮间质转化的研究进展一．参考文献…………………………………………………………………………33致谢…………………………………………………………………………………37华中科技大学硕士学位论文HPV16型E7与EMT之间关系的研究中文摘要【目的】将真核表达质粒psilencer2.1-U6-hyg-shE7和pcDNA3.1-E7分别导入宫颈癌细胞株SiHa、C33a，人为改变两种细胞株中HPV16型E7基因的表达，通过对照研究揭示E7基因表达的变化与EMT之间的关系。【方法】利用已构建的真核表达质粒psilencer2.1-U6-hyg-shE7与pcDNA3.1-E7，分

6、别转染宫颈癌细胞株SiHa、C33a，然后用药物Hygromycin和G418在合适的浓度下筛选，获得能够稳定沉默或者稳定表达E7基因的细胞株SiHa-psilencer2.1-U6hygro、SiHa-psilencer2.1-U6hygro-shE7、C33a-pcDNA3.1（+）及C33a-pcDNA3.1（+）-E7；运用细胞划痕实验和transwell检测细胞系的迁移运动侵袭能力；利用Real-timePCR、Westernblot分别在RNA水平和蛋白水平检测E7基因表达变化与EMT指标之间的变化关系。【结果】1.细胞划痕实验的结果显示：在SiHa-Blank、SiHa-v

7、ector及SiHa-shE7这三类细胞中，相对于空白对照和阴性对照来说，E7基因表达被沉默了的SiHa-shE7迁移运动能力明显降低（P<0.05），差异具有统计学意义；另外，在C33a-Blank、C33a-vector及C33a-E7这三类细胞中，相对于空白对照和阴性对照来说，高表达E7基因的C33a-E7迁移运动能力明显升高（P<0.01），差异具有统计学意义。2.Transwell细胞体外侵袭实验发现，SiHa-Blank