小鼠肝脏卵圆细胞增殖和凋亡机制的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文名称中文名称HOCHepaticovalcell卵圆细胞2-AAF2-Acetaminodofluorene2-乙酰胺基芴CK19Cytokeratin-19细胞角蛋白19PHPartialhepatectomy部分肝切除CK7Cytokeratin-7细胞角蛋白7CK18Cytokeratin-18细胞角蛋白18ROSReativeoxygenspecies活性氧DMSODimethylsulphoxide二甲基亚砜ALBAlbumin白蛋白CDECholine-deficientethionine

2、-supplemented胆碱不足乙硫氨酸补充Trx2Thioredoxin-2硫氧还蛋白2AFPAlphafetoprotein甲胎蛋白PCRPoly-merasechainreation聚合酶链反应WBWesternBlotting免疫蛋白印迹FCMFlowcytometry流式细胞术IHCImmunohistochemistry免疫组织化学染色IFImmunofluorescenece免疫荧光PMSFPhenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物TrisTrisaminomethane三羟甲基氨基甲烷ODOptica

3、ldensity光密度值HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶DAB3,3’-diaminobenzidine3,3’-二氨基联苯胺NF-kBNuclearfactorκB核因子kBLSCLiverstemcell肝脏干细胞EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸1独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文

4、中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文第一部分2

5、-AAF+2/3PH诱导成体小鼠卵圆细胞模型的建立及卵圆细胞的分离、培养和鉴定摘要目的建立稳定的诱导成体小鼠肝脏卵圆细胞的增殖模型，及稳定高效对卵圆细胞进行分离和培养的方法，观察卵圆细胞的增殖能力，生物学特性，对小鼠肝脏卵圆细胞标志物进行实验室检测，并证明其分化潜能。方法利用喂饲2-乙酰氨基芴（2-AAF）＋2/3肝大部分切除方法诱导小鼠肝脏卵圆细胞的增殖。经改良的经门静脉灌注胶原酶消化，等密度Percoll离心法分离卵圆细胞，并在体外进行长期培养。运用免疫组织化学染色观察卵圆细胞的增殖情况，流式细胞仪检测分析，免疫荧光、RT-PCR和糖原染色对分

6、离培养的卵圆细胞表型加以鉴定。结果增殖模型中的肝脏组织中可以发现有明显的卵圆细胞增殖，并能够分离培养出稳定传代的卵圆细胞。分离并体外培养的卵圆细胞呈集落样生长，呈铺路石样，卵圆细胞体积较小，细胞胞浆少，体积大小不均一，核浆比例大，为正常肝细胞的约1/3大小，细胞直径为8-10µm。运用流式细胞仪检测，免疫荧光、RT-PCR和糖原染色技术对体外培养的卵圆细胞进行鉴定，证实培养的细胞表达CK19,PKM2,C-kit,CX32,CX43,AFP,ALB,AML-1等抗原，证实该细胞确为卵圆细胞，该细胞具有向肝细胞和胆管上皮细胞分化的潜在能力。结论运用2

7、-AAF+2/3PH的方法可以稳定诱导小鼠卵圆细胞的增殖，改良的经门静脉灌注胶原酶消化，等密度Percoll离心法可以高效的分离卵圆细胞，分离出的卵圆细胞可以在体外进行长期培养。本方法为少数能够顺利诱导小鼠体内卵圆细胞增殖活化，并能够稳定分离和培养出卵圆细胞的方法之一，为在多品系实验性啮齿类动物的肝癌研究奠定研究基础。关键词：2-乙酰氨基芴；肝大部分切除；卵圆细胞；诱导；分离；培养；鉴定2华中科技大学硕士学位论文PartIActivation,isolation,cultureandcharacterizationofhepaticovalcell

8、sfromadultmicewithN-2-acetylaminofluorenedietand2/3partialhep