眼内注射环孢素对早期糖尿病病鼠血—视网膜屏障的作用与其机制分析

《眼内注射环孢素对早期糖尿病病鼠血—视网膜屏障的作用与其机制分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士研究生学位论文眼内注射环孢素对早期糖尿病鼠血一视网膜屏障的作用及其机制研究．屿—k刖声随着人们的生活水平不断提高，世界范围内糖尿病患者不断增加。DR是糖尿病引起的最严重的眼部并发症，目前己经成为很多发达国家最主要的致盲原因n3。据调查，全球大约有DR患者9300万人，严重危害人们的身体健康H¨。DR公认为是一种多因素疾病，其发病机制相当复杂，各种因素在DR不同的发展阶段扮演着不同角色。近年来，随着研究的不断深入，人们逐渐意识到炎症和免疫因素在DR的发病机制中起重要作用幢一1。长期的慢性低水平亚临床炎症和免疫反应可引血管内皮细胞破坏、周细胞的凋亡、色素上皮细胞功能

2、障碍等，使BRB遭到破坏从而导致渗出、出血、水肿等严重的视网膜病变H】。白细胞黏附到视网膜毛细血管内皮是DR最早的组织学改变之一晦1，白细胞粘附到视网膜毛细血管的内壁，可以引起血管功能障碍、血流缓慢及血管无灌注，缺氧状态可以刺激VEGF等多种细胞因子分泌，促进DR的发生发展∞1。ICAM-1是炎症反应中介导白细胞和毛细血管内皮细胞相互作用最主要的黏附分子口】。白细胞黏附与ICAM一1的表达有一定的相关性，ICAM一1抗体或者敲除ICAM一1基因可以有效预防白细胞的附壁和由此造成的内皮细胞损伤，减轻BRB的破坏阳3。VEGF是VEGF家族的总成，VEGF家族包括VEGF—A，VE

3、GF—B，VEGF—C，VEGF—D，VEGF—E和血硝、板生长因子(placentalgrowthfactor，PlGF)，可由多种细胞分泌，具有显著的促血管内皮细胞增殖和增大血管通透性的作用，VEGF是导致BRB屏障破坏的主要因素，在DR患者的视网膜及玻璃体中VEGF表达的显著升高哺1。鉴于这两种细胞因子在DR的发生发展过程中发挥的重要作用，一直以来研究者都希望找到合适药物通过合理的途径抑制IC斛1及VEGF在眼内的表达，以达到预防和治疗DR的目的，目前VEGF抑制剂的研究取得了很大的进展，一些药物已经用于DR的临床治疗。环孢菌素A(Ciclosporin，CsA)是一种脂

4、溶性的真菌代谢产物，具有很强的重庆医科大学硕士研究生学位论文免疫抑制作用和抗炎作用。在以往的研究发现，CsA能下调ICAM一1的表达，抑制T细胞与内皮细胞的粘附；抑制RPE细胞以及成纤维细胞VEGF的表达，抑制新生血管的形成阳。01。近年来的研究证实CSA对难治性葡萄膜炎，角膜炎等免疫相关性眼病也有较好的疗效。用药常常是全身给药，会引起全身各个系统的不良反应。而且由于血一眼屏障这一特殊结构的存在，全身给药常常不能够在眼部达到有效地治疗浓度。这就促使研究者去探索新的给药方式来解决毒副作用和给药浓度的问题。本研究将通过大鼠玻璃体腔注射的方式，来评价CsA能否对早期糖尿病鼠血一视网膜

5、屏障的破坏起到保护作用并探讨其可能的作用机制，为免疫抑制剂应用于DR的治疗提供一定的实验基础和理论依据。材料及实验方法1．实验动物和仪器设备、试剂1．1实验动物：选取8．10周龄的健康SD雄性大鼠(由重庆医科大学动物实验中心提供并代养)60只，SPF级，体重在220．2509之间，所有动物在整个饲养的过程中不限食水，模拟自然环境昼夜光线交替照明，室内通风条件良好，饲养室内的相对湿度控制在40％～70％，室温为18～22℃。实验前所有动物经过裂隙灯、检眼镜检查双眼无异常者纳入实验。1．2主要仪器及试剂1．2．1主要仪器重庆医科大学硕士研宄生学位论文微量注射器30G针头电子天平微量

6、电子天平美国WPI公司上海康德莱梅特勒．托利多日本SHIMADZU79-l磁力加热搅拌器江苏中大高压灭菌锅日本SANYOELIXl0纯水系统重庆和平吉隆多功能微波炉广东格兰仕HD3l00超声细胞破碎仪重庆迈克科技石蜡切片机展烤片机正置相差显微镜转膜器光学显微镜超净工作台德国Leica天津天利航空日本O删PUS美国Bio．Rad重庆迈克科技重庆医药股份OneTouch血糖仪美国强生多功能电磁炉正置荧光显微镜凝胶成像分析仪广东美的德国Leica美国Bio—RadMze多功能酶标仪美国MD脱色摇床高速低温离心机9重庆医药股份德国Eppendorr重庆医科大学硕士研究生学位论文恒温水箱

7、电热培养箱S40酸度仪江苏中大上海跃进重庆和平吉隆．80℃超低温冰箱美国ThernloForma电泳仪北京六一PDQuest8．02D图像分析软件美国Bio．Rad1．2．2主要试剂甘氨酸(Mw75．07)北京鼎国DMS0复方托比卡胺美国SIGMA日本参天制药株式会社M_PER细胞组织裂解液美国THERMO链脲佐菌素环孢素VEGF试剂盒美国SIGMA美国BBL美国RD凝胶配制试剂盒江苏碧云天小鼠抗ICAM一1单抗Abc鲫公司羊抗白蛋白多克隆抗体Abcam公司兔抗羊、抗小鼠IgG北京博奥森SP