甜菊苷微生物酶法转化及大孔树脂吸附分离的研究

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1、南京师范大学硕士学位论文甜菊苷的微生物酶法转化及大孔树脂吸附分离研究姓名：胡静申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：陈育如20080101南京师范大学硕士论文甜菊苷的微生物酶法转化及大孔树脂吸附分离摘要甜菊糖中主要含甜菊苷(SS)莱鲍迪苷A(RA)两种成分。其中含量较低的莱鲍迪苷A(＆吣是甜菊糖中呈味品质最好的组分；甜菊苷(SS)含量较高，但因其味质中的后苦味影响了甜菊糖作为天然甜味剂的广泛应用。由于SS与RA在化学结构和物理性质上非常接近，使RA与SS的分离非常困难。环糊精葡萄糖基转移酶(CGTaSe)具有将SS转化为RA改良甜菊糖味

2、质的功效，本工作在选育了高产环糊精葡萄糖基转移酶的芽孢杆菌基础上，对产酶活力较高的Sx芽孢杆菌进行了菌种鉴定，结合菌体与菌落形态特征以及16SrRNA序列分析，鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubal捃)。在用Sx菌产环糊精葡萄糖基转移酶的发酵中，使用玉米淀粉1．O％，豆粕粉2％，M＆S04·7H200．02％，K2HP040．1％培养基，于30℃，pH6．5，装液量50mL，220rpm，60h的条件下，CGT嬲e酶活性可达5596I，／mI，。对所产生的CGTase酶性质研究表明：该酶的最适温度为40℃，最适pH值为6．5，对温度

3、及pH的适应范围均较宽，分别为30℃-50℃及pH5．5—9．0．’用CGT鹊e酶对SS的转化研究表明，含SS>50％的甜菊总苷溶液在50℃恒温条件下转化48h后，甜菊苷溶液中的RA／SS比值从转化前的0．45上升为0．53．，本工作利用大孔树脂对RA和SS的吸附选择性，以分离甜菊糖的这两种主要成分。在研究大孔吸附树脂对甜菊糖各组分的吸附选择性等性能的基础上，筛选了对RA和SS吸附选择性差异大，分离效果好的D．107及D．108树脂，得到了富含RA的组分。对D．107及D．108树脂进行吸附及洗脱性能的研究表明：D．108树脂静态分离富集R

4、A的能力强，洗脱效果最好的溶剂是50％甲醇。对大孔树脂D．108进行的动态吸附及洗脱性能的研究结果表明：在长径比10：1，流速2BV&，上样液浓度8m卧【lL的条件下，所富集RA的含量比原液提高20．39％．”’关键词：甜菊苷，莱鲍迪苷A，枯草芽孢杆菌，大孔树脂，分离南京师范大学硕士论文甜菊苷的微生物酶法转化及大孔树脂吸附分离AbstractSteviathatcontainsmainlytWOcomponents，stevioside(SS)andrebaudioside(RA)isrestrictedinextensiveapplica

5、tionasnaturaledulcoratorbecauseofthebittertasteofSS．Beacauseofthehilshsimilarityofchemicalstructureandcharacter,RAandSSareverydifficulttobeseparated．Cyclodextringlycosyltransferase(CGTase)couldimprovethetasteofsteviside．StainSxWaschoose、加mthehigestabilityofproducingCGTasea

6、ndwasidentifiedasBacillussubtilisonthebasisofphysicalcharacterizationand16SrRNAsequenceanalysisandneighbour-joiningtree．Withthefermentationconditions1％maizestarch,2％def．atbeanpowder,0．02％M92S04·7H20，O．1％K2HP04，30℃，50ml，60h220rpm，theCGTaseenzymeactivityofstrainSxcouldreacht

7、o5596咖．TheenzymologiccharacterofCGTaseproducedbySxWasstudied．Theenzymeattaineditsmaximumactivityinthepn6．5at40"C．ThesuitablerangeofpHwas5．5—9．0，andtemperatureWas30"(2—50。C．AftertheSS>50％steviosidetransformed48hat50℃，theratioofRA／SSchangedfrom0．45to0．53．MacroporousresinsD一1

8、07andD一108wereselectedwithhighadsorptioncapacityandadsorptiveselectivitypropertiesofRAthr