呋喃妥因代谢物（ahd）elisa检测试剂盒说明书

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1、呋喃妥因代谢物（AHD）ELISA检测试剂盒说明书一、概要用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AHD衍生物的特异性抗体，具有很高的精确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物的AHD经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物AHD代谢物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中呋喃妥因代谢物

2、的残留量。三、适用范围可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛、鱼、虾等）、牛奶和蜂蜜中呋喃妥因代谢物的残留量。四、交叉反应率呋喃妥因代谢物…………………………………………100%呋喃唑酮代谢物…………………………………小于0.1%呋喃它酮代谢物…………………………………小于0.1%硝基糠腙（呋喃西林）代谢物…………………小于0.1%呋喃唑酮………………………………………………小于1%呋喃它酮………………………………………………小于1%呋喃妥因………………………………………………13%呋喃西林…………………………………………小于1%五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/

3、630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅洗耳球┅┅容量瓶：100ml、1L┅┅玻璃试管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：50ml┅┅微量移液器：单道20ml～200ml、100ml～1000ml多道250ml试剂：┅┅乙酸乙酯(分析纯)┅┅正己烷（或正庚烷）(分析纯)┅┅三水合磷酸氢二钾(分析纯)┅┅甲醇(分析纯)┅┅二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）（分析纯）（供奶样用）┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7H2O)(分析纯)（供奶样用）┅┅浓盐酸┅┅氢氧化钠(分析纯)┅┅去离子水六、

4、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb，0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb3、高浓度标准品：（1ml/瓶）100ppb4、酶标二抗12ml……………………红色帽5、抗体工作液7ml……………………绿色帽6、底物液A液7ml……………………白色帽7、底物液B液7ml……………………红色帽8、终止液7ml……………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液40ml………………………透明帽10、2×浓缩复溶液50ml………………………蓝色帽11、2-硝基苯甲醛15.1mg……………………黑色帽七、溶液的配制配液1:衍

5、生化试剂向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml（浓度为10mM）。配液2:C液（供奶样用）：0.36M亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）溶液称取12.5g二水合亚硝基铁氰化钠加去离子水定容至100mlD液（供奶样专用）：1M硫酸锌（ZnSO4·7H2O）溶液称取29.8g硫酸锌用去离子水定容至100ml配液3:0.1M磷酸氢二钾溶液称取22.8g三水合磷酸氢二钾加去离子水定容至1L。配液4:1M盐酸溶液量取8.3ml浓盐酸加去离子水定容至100ml。配液5:1M氢氧化钠称取4.0g氢氧化钠加去离子水定容至100ml。配液6:甲醇-水溶液量取甲醇90ml加去

6、离子水10ml混匀。配液7:复溶工作液用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1体积比进行稀释（1份2×浓缩复溶液+1份去离子水）用于提取样本的复溶，复溶工作液在4℃环境可保存一个月。配液8:洗涤工作液用去离子水将20×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。八、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果（c）衍生化试剂可于2-8℃保存半年。（d）未处理的

7、样本冷冻保存。（e）处理好的样本可在2-8℃避光保存24小时。（一）肌肉、肝脏、水产（鱼虾等）组织前处理方法┅┅用均质器均质样本┅┅取1.0±0.05g的均质物至50ml聚苯乙烯离心管中；┅┅加入5ml甲醇-水溶液（见配液6），用振荡器振荡5min，3000g以上离心10min，去除全部上清液；（本步骤可降低样本基质干扰）┅┅加入4ml的去离子水，用涡旋仪涡动溶解，加入0.5ml1M盐酸溶液（见配液4）和10