db33-t 598-2006 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定——液相色谱-串联质谱法

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1、DB33/T××××—××××浙江省质量技术监督局发布2006-02-08实施2006-01-05发布水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定——液相色谱-串联质谱法Determinationofresiduesofmalachitegreenanditsmetaboliteinaquaticproducts——LC-MS/MSmethodDB33/T598—2006DB33浙江省地方标准ICS67.050B501DB33/T598—2006前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由浙江省海洋与渔业局提出并归口。本标准起草单位：浙江省水产质量检测中心。

2、本标准主要起草人：张海琪、何中央、郑重莺、王扬、宋琍琍。IDB33/T598—2006水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定——液相色谱-串联质谱法1　范围本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量的检测。本标准的检测限为0.50µg/kg。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注

3、日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3　原理样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿以乙酸铵盐溶液和乙腈提取，经二氯甲烷萃取，阳离子交换柱净化，液相色谱串联质谱仪测定，内标法定量。4　试剂和材料除非另有说明，仅使用分析纯试剂。4.1　水：应符合GB/T 6682规定的一级水。4.2　乙腈：色谱纯。4.3　二氯甲烷。4.4　甲醇：色谱纯。4.5　无水乙酸铵：优级纯。4.6　冰乙酸。4.7　盐酸羟胺。4.8　对甲苯磺酸。4.9　中性氧化铝：粒度为100目～200目，层析用。4.10　甲酸：优质纯。4.11　无水硫

4、酸钠。4.12　一缩二乙二醇。4.13　抗坏血酸。4.14　孔雀石绿草酸盐、无色孔雀石绿、氘代孔雀石绿、氘代无色孔雀石绿标准品：纯度≥98％。4.15　乙酸铵溶液：0.05mol/L(pH4.5)，称取3.85g无水乙酸铵（4.5）溶解于1000mL水中，用冰乙酸（4.6）调pH到4.5。4.16　盐酸羟胺溶液：25%（m/v），称取12.5g盐酸羟胺（4.7）溶于50mL水中。4.17　对甲苯磺酸溶液：1.0mol/L，称取17.2g对甲苯磺酸（4.8），用水稀释至100mL。4.18　抗坏血酸甲醇溶液：1.0g/L，称取10mg抗坏血酸（4.1

5、3）溶解于10mL甲醇溶液中，临用前配制。4.19　阳离子交换柱：PRS柱，500mg/3mL，使用前用5mL乙腈：二氯甲烷（80+20）活化。5DB33/T598—20061.1　洗脱液：5mL25%氨水，5mL抗坏血酸甲醇溶液（4.17），90mL甲醇混合，临用前配制。1.2　样品定容液：取80mL乙腈，15mL乙酸铵溶液(4.15)和5mL抗坏血酸甲醇溶液（4.18），临用前配制。1.3　标准储备溶液：100µg/mL，准确称取孔雀石绿草酸盐、无色孔雀石绿、氘代孔雀石绿、氘代无色孔雀石绿标准品，用乙腈分别配制成100µg/mL的标准贮备液，-

6、18℃避光保存备用，有效期为三个月。1.4　混合标准储备溶液：1µg/mL，吸取孔雀石绿和无色孔雀石绿的标准储备溶液（4.22），用乙腈稀释成1µg/mL，-18℃避光保存，有效期为一个月。1.5　混合内标工作溶液：100ng/mL，用乙腈稀释内标储备溶液（4.22），配制成每毫升含氘代孔雀石绿和氘代无色孔雀石绿各100ng的混合内标工作溶液，-18℃避光保存，有效期为一个月。1.6　混合标准工作溶液：根据需要，临用时用乙腈稀释混合标准储备溶液（4.23）和混合内标工作溶液，配制成适当浓度的混合标准工作溶液，每毫升混合标准工作溶液含有氘代孔雀石绿和

7、氘代无色孔雀石绿各10ng。2　仪器2.1　液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。2.2　均质器。2.3　台式离心机：5000r/min。2.4　旋转蒸发仪。2.5　固相萃取装置。2.6　氮吹仪。3　操作方法3.1.1　提取称取已均质的样品5g(精确到0.01g)，置于100mL具塞离心管中，加入200µL混合内标工作溶液（4.24），然后依次加1.5mL盐酸羟胺溶液、2.5mL对甲苯磺酸溶液和5mL 乙酸铵溶液（4.14），10000r/min均质30s，振荡2min。然后取另一具塞离心管加入20mL乙腈，清洗均质器刀头后合并到样品提取离

8、心管中，再加入10g中性氧化铝，涡旋混匀30s，振荡15min后，以4000r/min离心10min，将上清液转移至盛有1