左归丸对痴呆鼠氧化反应及细胞凋亡的影响

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1、左归丸对痴呆鼠氧化反应及细胞凋亡的影响【摘要】　　目的探讨左归丸对AD鼠氧化反应及细胞凋亡的影响。方法模型组以β淀粉样蛋白（Aβ）注射海马制备AD动物模型，各治疗组分别在造模的同时灌胃左归丸和抗脑衰胶囊、脑复康。采用生化法检测各组大鼠脑匀浆CAT，MAO，免疫组化方法观察各组大鼠海马神经元TNF-α蛋白的变化，运用RT-PCR测定各组海马caspase3基因的表达。结果灌服后左归丸治疗组均能明显提高AD大鼠脑组织CAT活性、抑制MAO活性；中药治疗组能显著下降海马区域TNF-α含量和下调caspase-3mRNA的表达。结论左归丸对痴呆鼠海马神经元细胞凋亡有抑制作用，其作用机理可能是通过提高

2、CAT等抗氧化酶作用和抑制MAO活性，下降海马区域TNF-α蛋白含量和下调caspase-3mRNA的表达。【关键词】左归丸老年性痴呆β淀粉样蛋白氧化反应细胞凋亡　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofZuoguier'sdisease(AD)modelrats.MethodsThehippocampusinjectedβ-amyloid(Aβ)tomakeADmodels.Everygroupeasuredbythemethodofbiochemistryandmolecularbiology.TheexpressionTNF-αprotE

3、Inofhippocampusneuronsmunohistochemistrymethod.Theexpressionofcaspase-3geneeasuredbythemethodsofRT-PCRandagarosegelelectrophoresis.ResultsZuoguiprovetheactivityofCATinthebrain.Zuoguipalneurons.ConclusionZuoguipalneuronsinADmodelrats.TheeffectivemechanismmayassociatethatZuoguiprovestheactivityofCATi

4、nthebrain,reducestheexpressionofcaspase-3geneandTNF-αproteinofHippocampalneurons.　　Keyanniae;Alzheimer'sdisease;β-amyloidprotein;Stressresponseofoxidation;Apoptosis　　老年性痴呆（AD）是一种常见于老年人的神经退行性变性疾病。本实验根据AD发病的β淀粉样蛋白（Aβ）致病学说［1］制备AD动物模型，观察左归丸对AD抗氧化作用及超微结构的影响，旨在探讨本方防治AD的作用机理。　　1器材　　1.1动物健康AO检测试剂盒由南京建成生物化学

5、有限公司提供。TNF-α免疫组化试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。pv二步法免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。TRIzolReagent、ThermoscriptTMRT-PCR试剂盒均由Invitrogen公司生产。引物由上海生物工程有限公司合成。　　1.3仪器脑立体定位仪（NARISHIGESN-2型日本）、摄影显微镜（OLYMPUS日本）、PCR扩增仪（PE2700）、紫外凝胶成像仪（Labm，中线右侧旁开2.2mm，用手摇钻钻开颅骨，暴露硬脑膜，微量注射器自脑表面垂直进针2.8mm，然后向脑组织内缓慢注射Aβ1μl,注射5min,留针5min。空白组不处置，假损伤组

6、注射生理盐水1μl，余组均注射Aβ。　　2.3给药方法及取材中药治疗组腹腔注射造模同时分别给予左归丸高、低剂量灌胃〔相当含生药5g/(kg·d）和2.5g/(kg·d）〕,中、西对照组分别给予抗脑衰胶囊、脑复康灌胃〔（含生药分别为2.4g/(kg·d）,0.02mg/(kg·d）〕，余组灌胃等量蒸馏水，1次/d，共4周。脑内注射Aβ1周后，每组取9只迅速处死，在冰上断头取脑，在针孔处切取脑组织置于多聚甲醛液中固定供光镜观察使用。余下在冰上迅速处死，左侧取大脑（除小脑）作生化指标；右侧取脑迅速分离海马置于液氮中冷冻以备提取RNA使用。　　2.4观察指标　　2.4.1MAO，CAT测定大鼠断头取

7、脑，制备脑匀浆，离心，取上清液。测定参照试剂盒说明书。　　2.4.2脑TNF-α蛋白表达检测脑组织固定，梯度脱水，透明，包埋，切片，采用免疫组化观察鼠脑海马神经元TNF-α蛋白表达。　　2.4.3大鼠海马caspase-3基因的表达按Trizol试剂盒说明书提取RNA。逆转录体系参照ThermoscriptTMcDNA合成试剂盒说明书。聚合酶链式反应（PCR）：引物设计由美国NCBI数据库提供RNA全序列、p