益母草总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用论文

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1、益母草总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用论文.freelg/ml，回收率为101.6%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程.freelakefulluseoftheresourcesofLeonurusandavoidLeonurusanditsdifferentiatingandtheeffectonscavengingofhydroxylradicals.MethodsTheflavonesLeonurusethod.Aspectrophotometryg/mlandtherateofrecoveryethodstoobtainhighquantityandpurity

2、ofextractsfromLeonurus.Thismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.Itisanidealleonurushaseffectsonscavengingofhydroxylradicals.Keyl95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤。滤渣再加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25ml左右为止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。2.2测定方法依据以芦丁为对照品测定益母草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化

3、合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。2.3定量实验—总黄酮的含量测定2.3.1波长的选择取样品液适量，在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4

4、%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白，于510nm处测吸光度。吸光度测定结果见表1。表1紫外可见分光光度计测定吸光度（略）根据上表得回归方程：=-0.0311+13.5184X，r=0.99992.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml，置10ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度=0.246，根据回归方程：=-0.0311+13.5184X，计算样品中总黄酮的含量X=0.4099mg/ml。2.3.4回收实验精密量取样品液2.00ml，加入标准芦丁对照品2.00ml（0.10mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，

5、求出回收率为101.6%。2.4定性实验—总黄酮的鉴别2.4.1颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸—镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。2.4.2纸层析

6、取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5(体积比)为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。2.5总黄酮提取物对·OH的清除作用参照Fenton反应的方法建立反应体系模型［5］，利用H2O2与Fe2+混合产生·OH，但由于·OH具有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加入水杨酸，就能有效地捕捉·OH，并产生有色产物。反应式如下：H2O2+Fe2+→Fe3++·OH+OH-2·OH+COOHOH→COOHOHOH+H2O(无色)(有色)该产物在510nm处有强吸收，若在此反应体系中加入具有清除·OH功能的被测物，便会

7、与水杨酸竞争·OH，从而使有色产物生成量减少，采用固定反应时间法，在相同体积的反应体系(8.8mmol/LH2O21ml，9mmol/LFe2+1ml，9mmol/L1ml水杨酸—乙醇溶液)加入一系列不同浓度的益母草总黄酮提取液，并以蒸馏水为参比，与试剂空白液比较，在510nm处测量各浓度下的吸光度，便能测定被测物(总黄酮)对·OH的清除作用，其清除率计算公式：清除率(％)=Y0-YxY0×100%以实验的提取液总黄酮作为样品，分别取不同体积的