qa-2参和脐带间充质干细胞移植治疗小鼠aih中免疫调控地研究

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1、苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作导师日期：∥2少f，≯．乡．少易Et

2、期：麴!兰：呈：兰乡Qa-2参与脐带问充质干细胞移植治疗小鼠AIH中的免疫调控研究中文摘要Qa-2参与脐带间充质干细胞移植治疗小鼠AIH中的免疫调控研究中文摘要一、脐带间充质干细胞分离、培养、鉴定以及对T淋巴细胞的gPfl；U作用目的：探讨小鼠脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的分离、培养体系的建立及其在体外对T淋巴细胞的抑制作用。方法：采用双酶消化法消化C57BL／6孕鼠脐带组织，进行贴壁分离和传代培养，绘制细胞生长曲线。通过倒置显微镜观察细胞形态，用流式细胞仪检测细胞表面标志，免疫细胞化学法对UC-MSCs进行成脂、成骨和成软骨定向诱导。免疫磁珠分选

3、小鼠脾脏T淋巴细胞。3H-TdR掺入法检测UC-MSCs对PHA刺激后T细胞增殖的抑制作用，ELISA法检测培养基上清液中细胞因子IFN—Y、IL-2、ILl4和IL一10水平变化。结果：(1)UC-MSCs在培养瓶中贴壁生长，逐渐纯化，呈成纤维细胞形态，放射状或旋涡状生长；高表达CD73、CD90、CDl05，不表达CD34、CD45、HLA-DR、CDl9、CDllb分子；在体外能向成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞方向分化。(2)免疫磁珠分选小鼠脾脏T淋巴细胞的纯度高于90％。(3)UC-MSCs可抑制活化T细胞体外增殖，调节IFN--7、IL-2、

4、IL_4、IL一10的分泌，并呈数量依赖性。结论：采用双酶消化法可以成功分离、培养出孕鼠uC-MSCs；UC-MSCs在体外具有抑制T细胞增殖的作用，调节炎症因子IFN-q,、IL-2、IL_4、IL一10的分泌。关键词：脐带间充质干细胞；免疫调节；细胞因子二、Oa-2参与脐带间充质干细胞抑制活化T淋巴细胞增殖的免疫调控目的：探讨UC-MSCs对T淋巴细胞的增殖产生抑制效应的同时，其分泌Qa-2蛋白对T淋巴细胞内TC-PTP和Lck信号分子的免疫调控效应。方法：CFSE和DAPI染料对UC--MSCs和T淋巴细胞体外染色。采用ELISA法、流式细胞术及R

5、T-PCR、Western-blot分析UC-MSCs表达的H2-Q7基因和Qa-2蛋白，I中文摘要Qa-2参与脐带间充质干细胞移植治疗小鼠AIH中的免疫调控研究以及在MLR体系中不同时间点H2-Q7基因和Qa-2蛋A变化。Qa-2单克隆抗体对UC-MSCs抑制活化T淋巴细胞增殖中的阻断作用及阻断作用对培养体系中细胞因子IFN—Y和IL—10水平的影响。RT-PCR、Western-blot法检测不同培养代数UC-MSCs中H2-Q7基因和Qa-2蛋白的变化情况。ELISA法检测rmlFN—Y干预后培养基上清液中Qa-2蛋白的分泌水平。结果：(1)UC-

6、MSCs经CFSE和DAPI染色后，胞浆为绿色，胞核为蓝色，界限清晰。(2)UC-MSCs对T淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用，在MLR体系中加入Qa-2单克隆抗体后，其抑制作用得到部分逆转。Transwell试验表明在UC-MSCs与T淋巴细胞无接触情况下，仍有部分抑制作用。(3)在MLR体系中加入Qa-2单克隆抗体后，IFN—Y水平轻度上升(P=O．0015)，而几一10水平轻度下降(P=0．0034)。(4)在1、3、5代UC-MSCs中，H2-Q7和Qa-2的表达量随代数增加而逐步下降。(5)流式细胞术分析结果显示，UC-MSCs表面和胞浆中均有Q

7、a-2蛋白，阳性率分别为58．75％和46．21％。(6)MLR体系中，在共培养lh、12h、24h、36h的4个时间点，LckmRNA变化为先下降后逐渐上升至正常水平，其变化呈现一过性改变；p56Lck蛋白在24h、36h、48h、60h的4个时间点也有类似的变化。TC-PTPmRNA在1h、12h、24h、36h的4个时间点变化为先上升后逐渐下降至正常水平，其变化呈现一过性改变；TC-PTP蛋白在24h、36h、48h、60h的4个时间点也有类似的变化。(7)在rmlFN—Y干预下，UC-MSCs分泌Qa-2蛋白量增加，且与rmlFN—Y呈数量依赖性

8、。结论：小鼠UC-MSCs分泌、表达Qa-2蛋白，且与rmIFN—y呈数量依赖性