传染性造血器官坏死病毒非结构蛋白NV对病毒复制的影响

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1、摘要摘要传染性造血器官坏死病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＩＨＮＶ）感染鲑科鱼类可引起造血器官坏死，ＩＨＮＶ高致病力毒株对鲑鳟幼鱼的致死率高达９０％以上。此病广泛流一行于北美、欧洲、亚洲的各国，已成为世界鲑鳟鱼类养殖业的重要疫病之。宿主的天然免一－疫应答是抵抗病毒感染的第道防线，而激活ＮＦｋＢ信号通路是宿主发挥抗病毒作用的重要一机制之－－。本研宄筛选影响ＮＦｋＢ信号通路的ＩＨＮＶ相关蛋白，研究其对ＮＦｋＢ信号通路的调控机制，为探讨ＩＨＮＶ的致病机理提供了科学数据。通过ＮＦ－ｋＢ荧光素酶报告系统检

2、测ＮＶ感染细胞后对ＮＦ－ＩＨｋＢ的转录活性的影响和筛选－ｋＢ活性的ＩＨＮＶ的蛋白－ＥＰＣ细胞均可激活ＮＦ－影响ＮＦ。结果表明：ＩＨＮＶ感染ＣＨＳＥ２１４和ｋＢ－－ｋＢ的转录活性－的转录活性，Ｌ蛋白激活ＮＦ，ＮＶ蛋白抑制ＮＦｋＢ的转录活性且Ｌ蛋白对ＮＦｋＢ，－的激活作用强于ＮＶ蛋白对ＮＦｉｃＢ的抑制作用。－ｋＢ信号通路抑制作用的分子机制，为研宄ＮＶ蛋白对ＮＦ，以ＮＶ的真核表达质粒转染细胞－６５ｋＢ下游炎症细胞因子的表达：ＮＶ蛋白抑检测ｐ的磷酸化、转定位及ｉＫＢａ与ＮＦ。结果表明Ｉ－－－制ＩｉｄＢａ的降解及ｐ６５的磷酸化和入核，抑制Ｌ１、ＩＬ８、ＩＬ１７、ＳＡＡ炎症

3、因子的表达；ＮＶ基３２５３２－３５ＥＧＤＬ３－ｋＢ起关键作用因的第位类核定位信号位点（）对抑制ＮＦ。通过重叠延伸ＰＣＲ方法将亲本毒株ｗ－－ｔＩＨＮＶＨＬＪ０９ＮＶ基因第３２３５位氨基酸突变为丙３２３５４－氨酸或者缺失这位氨基酸，拯救出ＮＶ（ＥＧＤＬ位点缺失的重组病毒，通过感染ＣＨＳＥ２１４）－ＰＣＲ鉴定组病毒、分子标识的鉴定、电镜观察及间接免疫突光检测鉴定细胞、ＲＴ，获得重－－－－ｒＩＨＮＶＮＶ－５和ｒＩＨＮＶＮＶ３－ｈＳＥ２１４ｉｃＢＴ３２３，（３２３重组病毒感染ＣＨ细胞后ＮＦ发生核转移表６５－明ＮＶ蛋白抑制ｐ的核转移，且第３２３５位氨基酸起重要作用。重

4、组病毒的生物学特性研－－－ＮＶ－ＮＶ．宄表明：ｒＩＨＮＶＱ５和ｒＩＨＮＶＴ３５在ＣＨＳＥ２１４细胞上的复制能力均低于亲本毒株３２３２３ｗ－－ｔＩＨＮＶＨＬＪ０９ＮＶ蛋白第３２３５，说明同时突变位四个氨基酸时会降低病毒的复制能力。－－－．．：ｗｔＩＨＮＶＨＵ０９、ｒＩＨＮＶＮＶ（ＩＨＮＶＮＶ对虹鳟稚鱼致病性试验结果显示３２５和ｒＴ３２３５３３．－ｌＨＮＶＡＮＶ－ＥＧＦＰ感染组分别在感染后第４天ｒ、第６天和第１０天出现死亡，死亡髙峰分别？？－６８７１０－－出现在第天、第天和未出现，ｔＩＨＮＶＨＬＪ０９、ｒＩＨＮＶＮＶ－３５ＩＨＮＶＮＶ－ｗＱ３２和ｒＴ３２３５

5、．一ｌＨＮＶ－ＡＮＶ－ＥＧＦＰ感染组２０天的累积死亡率分别是９０％ｒ、５５％、６０％和１０％。感染后同－－ＡＮＶ－ＥＧＦＰ、ｒＩＨＮＶ－ＮＶ－、ＩＨＮＶＮＶ组仅能引起时间虹鳟脏器病理变化可见ｒｌＨＮＶ３５ｒＴ－５（３２３３２３一－肝脏、心脏组织的病变，损伤程度低于亲本病毒ｗｔＩＨＮＶＨＬＪ０９感染组，定程度上也反映了重组病毒的致病性要明显低于亲本毒株。通过荧光定量ＰＣＲ方法检测虹鳟稚鱼感染病毒３２３５后细胞因子表达和肝、肾组织中的病毒含量，结果表明ＩＨＮＶＮＶＥＧＤＬ位点对抑制ＩＦＮ１、－－Ｍｘ－１和ＩＬ６的表达起着重要作用，与亲本毒ｗｔＩＨＮＶＨＬ

6、Ｊ０９相比，感染重组病毒的肝脏和－肾脏组织病毒拷贝数均不同程度的降低，可见ＮＶ基因全部缺失或第３２３５位四个氨基酸联合突变时，，其复制能力不同程度的降低且病毒毒力亦减弱。Ｆ－关键词：传染性造血器官坏死病毒；ＮｋＢ；ＮＶ；复制；病毒毒力ＩＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＮＶＰｒｏｔｅｉｎｏｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＨｅｍａｔｏｏｉｅｔｉｃｐＮｅｃｒｏｓｉｓＶｉｍｓＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ（ＩＨＮＶ）ｉｓｔｈｅｃａｕｓａｔｉｖｅ

7、ａｇｅｎｔｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓＩＨＮ），ｗｈｉｃｈｒｏｄｕｃｅｓｃｏｎｔａｉｏｕｓａｃｕｔｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎａｗｉｄｅｖａｒｉｅｔｏｆ（ｐｇｙｌｍｏｎｉｄｉｈｄｎｅｃｉｈｉｉｉｈｅｉｎｔｅｒｎａｓａｓｐｅｃｅｓ．ＩＨＮｃａｕｓｅｓａｅｍｏｒｒｈａｇｅａｎｒｏｓｓｏｆｅｍａｔｏｐｏｅｔｃｔｓｓｕｅａｎｄｏｔｒｌｏｒｇａｎｓ．Ｈｉ