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1、高效液相色谱法测定元胡止痛片中延胡索乙素的含量陈洪宝，李彩荣，杨庆胜，赵雪晖【关键词】元胡止痛片；,,延胡索乙素；,,高效液相色谱 摘要：目的建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量测定方法。方法C18ODS色谱柱(4.6mm×250mm,20μm)；流动相：甲醇0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）(55∶45)；检测波长：280nm；流速：1.0ml・min1。结果延胡索乙素对照品在0.1532~0.7660μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系，r=0.99999，平均回收率为99.53%。结论该方法操作简便，结
2、果准确，重现性好，可用于控制该制剂的质量。 关键词：元胡止痛片；延胡索乙素；高效液相色谱 元胡止痛片是2005版《中国药典》〔1〕收载品种，由延胡索（醋制）、白芷2味中药组成。具有理气、活血、止痛功能，用于气滞血淤的胃痛、胁痛、头痛及痛经等。是中药止痛著名方剂。现代研究表明，延胡索乙素具有较强的镇痛，镇静，催眠等药理作用〔2〕。因此，该成分是元胡止痛片中的有效活性成分之一。2005版《中国药典》〔1〕收载的元胡止痛片中延胡索乙素的含量测定方法为薄层色谱扫描法，操作比较复杂。本实验采用HPLC法改进延胡索乙素的含量方法，
3、并对测定方法学进行了研究。 1仪器与试剂 仪器：高效液相色谱仪(日本岛津CLASSVP10AVP)；C18ODS色谱柱(4.6mm×250mm,20μm)(大连依利特)；HP1050/3D化学工作站；样品：元胡止痛片，自制；对照品：延胡索乙素对照品，批号：110726200208，供含量测定用（中国药品生物制品检定所提供）；试剂：所用试剂均为分析纯、色谱纯；水为重蒸馏水(自制)。 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）(55∶45
4、)为流动相；流速1.0ml・min1，检测波长280nm；理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。 2.2对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每毫升含46μg的溶液，即得。 2.3供试品溶液的制备取本品10片，除去糖衣，研细，取细粉0.50g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液50ml,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25ml，置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5ml量
5、瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4线性关系考察精密称取延胡索乙素对照品3.83mg至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得混合对照品原液（153.2μg/ml）。精密吸取对照品原液1，2，3，4，5ml，分别至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(X)对峰面积(Y)作图，得到其标准曲线图。得回归方程Y=3.94×107X+0.02751，r=0.99999，n=5。延胡索乙素对照品在在0.1532~0.7660μg范围内，进样量与峰面积间呈良
6、好的线性关系。 2.5精密度实验准确吸取上述对照品溶液10.0μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，重复进样6次，RSD为0.42%。结果表明，本法精密度较好。 2.6稳定性实验取同一供试品溶液，分别于1，2，3，4，5，6h测定延胡索乙素的峰面积值，RSD为0.78%，结果显示供试品溶液在6h内稳定。 2.7重复性实验对同一批样品平行制备5份供试液,分别取10.0μl，注入液相色谱仪，进行含量测定，RSD为1.96%。表明本法重现性较好。 2.8阴性对照实验取缺延胡索的处方药材，按工艺制备制成缺延胡索的阴性制剂，照
7、供试品溶液制备方法制成阴性溶液，分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液各10.0μl，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，记录色谱图，从色谱图中可以看出，方中其它成分在本测定条件下，对延胡索乙素的含量测定无干扰。见图1~3。 图1对照品色谱图（略） 图2样品色谱图（略） 图3阴性样品色谱图（略） 2.9加样回收率实验精密称取已知含量的同一批号样品（延胡索乙素含量为0.45mg/g）9份，分为3个浓度组，称样量分别为0.17，0.25，0.32g，每组3份，均精密称定，3个浓度组分别精密加入对照品原液（延胡索乙素含
8、量为0.1532mg/ml）0.9，0.7，0.5ml，按供试品溶液制备方法及上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。 2.10供试样品的含量测定分别取不同批号的样品，按本方法的测定条件，分别测定各样品中延胡索乙素的含量。结果见表2。 表1延胡索乙素加样回收率实验（略） 表23批样品中延胡
