SNT1161-2010鹿流行性出血病检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!!"!"#$!$代替!"!#$$%$"&''&鹿流行性出血病检疫技术规范$%&'&()*(+,'-)-.-/0-'+,*1--)*.2&+3-''2&4*.5*6+&6+-05++'#$!$7!!7$!发布#$!!7$%7$!实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜１１６１—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１１６１—２００２《鹿流行性出血病琼脂免疫扩散试验操作规程》

2、。本标准与ＳＮ／Ｔ１１６１—２００２相比，主要的技术性差异如下：———增加了病原的分离及鉴定；———增加了病毒中和试验；———增加了荧光抗体试验；———增加了反转录聚合酶链式反应。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：杨晶焰、严树发、陈兵、艾军、华玉卓、叶玲玲、阮周曦、尹尚莲、董俊、周晓黎。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１１６１—２００２。Ⅰ犛犖／犜１１６１—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发

3、售鹿流行性出血病检疫技术规范１范围本标准规定了鹿流行性出血病的病原分离及鉴定、病毒中和试验、荧光抗体试验、聚合酶链式反应和琼脂凝胶免疫扩散试验检测方法。本标准适用于鹿流行性出血病的诊断和流行病学调查。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８０８８出入境动物检疫采样３疾病概述鹿流行性出血病（ｅｐｉｚｏｏｔｉｃｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｏｆｄｅｅｒ，ＥＨＤ）是由鹿流行性出血病病

4、毒（ＥＨＤＶ）引起的一种病毒性传染病。主要感染白尾鹿、牛、野牛、羊等。动物被感染后可视粘膜和浆膜出血，眼结膜和口腔粘膜暗红或紫蓝，有“蓝舌”样，粪和尿带血，有时唾液也带血，体温呈复相升高，剧烈休克而死亡。该病为非接触性传染病，库蠓可以带毒，并传播本病。其病原、流行病学、临床症状、病理变化、检疫及诊断、防制参见附录Ａ。４现场检验检疫及采样４．１现场检验检疫：逐头进行临床检查，根据临床表现和特异性病理变化做出初步诊断。４．２采样：按ＧＢ／Ｔ１８０８８的规定，逐头进行采样，并按规定填写《送样单》送实验室。５缩略语下列缩略语适用于本文

5、件。ＡＭＶＲＴ：鸟成骨髓细胞白血病病毒的逆转录酶ＢＨＫ２１（ｂａｂｙｈａｍｓｔｅｒｋｉｄｎｅｙ）：幼仓鼠肾细胞ＢＬＰ：乳糖蛋白胨缓冲肉汤ＣＰＥ（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ）：细胞病变ＤＥＰＣ（ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ）：焦碳酸二乙酯ＥＨＤＶ（ｅｐｉｚｏｏｔｉｃｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｏｆｄｅｅｒｖｉｒｕｓ）：鹿流行性出血病病毒ＲＴＰＣＲ：反转录聚合酶链式反应ＳＰＦ：无特定病原体动物ＴＣＩＤ５０：组织培养半数感染量Ｔｒｉｚｏｌ：酚与异硫氰酸胍组成的均相溶液１犛犖／犜１１６１—２０１０版权

6、所有·禁止翻制、电子发售６病毒分离及鉴定６．１病毒分离６．１．１试剂与材料５个／ｍＬ细胞悬液。６．１．１．１鹿胎肾细胞或幼仓鼠肾细胞（ＢＨＫ２１）：使用时配制成３×１０６．１．１．２ＥＨＤＶ阳性血清和阴性血清：试验前血清需经５６℃灭能３０ｍｉｎ。６．１．１．３１０日～１１日龄ＳＰＦ鸡胚。６．１．１．４细胞培养液、细胞维持液、细胞分散液、ＰＢＳ、ＢＬＰ等，配方及配制方法见附录Ｂ。６．１．２设备６．１．２．１倒置光学显微镜、荧光显微镜。６．１．２．２二氧化碳培养箱。６．１．２．３研钵或组织捣碎机、离心机。６．１．２．４可调微量移

7、液器。６．１．２．５细胞培养瓶、细胞培养板等。６．１．２．６照蛋灯、开孔器。６．１．３样品采集与处理６．１．３．１血液样品采集与处理取肝素抗凝血５ｍＬ，用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗涤血样３次～４次，每次２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清液后加入等量ＢＬＰ，置冰浴中用超声波（４０、１ｍｉｎ）处理，经处理的样品当天使用，使用前置μＡ４℃保存，剩余样品置－７０℃保存备用。６．１．３．２组织样品采集与处理无菌采集动物肾、脾、肝各５ｇ，剪碎后加入乳糖蛋白胨缓冲肉汤（ＢＬＰ）１０ｍＬ（含青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ、链霉素２０００／ｍＬ）

8、，置乳钵中研磨，置４℃浸泡４ｈ以上，取上清液５ｍＬ用超声波裂解（１００、μｇμＡ１ｍｉｎ～２ｍｉｎ）处理或冻融三次，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取上清液使用，使用前置４℃保存，剩余样品置－７０℃保存备用。６．１．３．３库蠓样品采集与处理取２００个～３００个库蠓盛于小试管