伤寒与副伤寒的实验室快速诊断法.doc

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1、伤寒与副伤寒的实验室快速诊断法作者：沈均南，卢道旭，陈祥兴【关键词】伤寒/副伤寒；实验方法；快速诊断　　［摘要］目的：改进伤寒、副伤寒的实验方法，缩短实验时间，提前发出实验报告，尽早对伤寒、副伤寒的鉴别诊断提供实验依据。方法：分别在每10ml各种诊断菌液内各加入20.0g/L美兰溶液5μl，按Widal方法稀释血清和滴加菌液，充分摇匀，37℃水浴10min，放微型振荡器震荡5min，从稀释倍数低至高的试验管开始用500r/min以下的速度离心5min，按传统的肥达氏实验操作方法观察和报告结果。结果:在93例实验对照的994管凝集管中，快速法有503管凝集，原法有491管

2、凝集，两法比较：差异无显著性(P＞0.05)；共有157管存在凝集程度的差异，其中快速法粗于原法的有115管（73.25%），原法粗于快速法的有42管（26.75%），快速法较原法敏感。两法比较：差异有非常显著性（P＜0.01）。结论：改进后的伤寒、副伤寒实验方法，具有凝集结果明显，方法敏感度较高，实验时间短等特点。　　［关键词］伤寒/副伤寒；实验方法；快速诊断　　伤寒、副伤寒是一种《中华人民共和国传染病防治法》［1］中规定报告的乙类急性肠道传染病。实验室用肥达氏试验对伤寒、副伤寒已有百年多的历史，尽管对其临床意义有多种看法，但是在目前仍然是临床诊断伤寒、副伤寒的主要实

3、验方法之一［2］。临床实验室对诊断伤寒、副伤寒诊断的实验方法多采用稀释自由沉淀法［3］，它的最大缺陷是实验时间长，操作繁琐或结果观察不明显等。为此，笔者经多年的实践探索，综合各种方法的利弊，对伤寒、副伤寒的实验室诊断方法进行了改进，采用快速离心的方法取代自由沉淀法，缩短了实验时间，提高了实验方法的敏感度，同时作了93例实验对照，两法结果差异无显著性，现报告如下。　　1临床资料　　本院住院和门诊的病人93例，其中男性56例，女性37例，年龄在12岁～57岁之间。　　2原理　　利用感染了伤寒或副伤寒的血清中含有伤寒或副伤寒抗体、该抗体能使伤寒或副伤寒菌体凝集沉淀的原理，将受

4、检血清按倍比稀释后，各加入一定量的相应伤寒或副伤寒菌液，经短暂的恒温，使菌体与血清中的抗体作用，菌体与菌体之间产生相互凝集，再用低速离心的方式加速菌体的沉淀，从而达到快速诊断的目的。3　　3材料与方法　　3.1材料　　诊断用H、O、甲、乙伤寒、副伤寒菌液（由上海生物制品研究所提供）。每10ml菌液加20.0g/L美蓝溶液50μl。　　3.2方法　　按传统的肥达氏实验操作方法［3］稀释血清和滴加菌液，充分摇匀，37℃水浴10min，放微型振荡器震荡5min，从稀释倍数低至高的试验管开始用500r/min以下的速度离心5min，按传统的肥达氏［3］实验操作方法观察和报告结果

5、。　　3.3统计学方法　　采用统计学卡方检验对本文的实验数据进行显著性统计分析处理。　　4结果　　在93例（两法共5208管）对照实验中，有994管凝集，凝集率为19.08%，快速法有503管凝集，凝集率为9.66%；传统方法有491管凝集，凝集率为9.43%；两法比较：差异无显著性(P>0.05)，见表1。表1快速法与传统方法的凝集结果比较(略)注:χ20.05=3.84。　　在994凝集管中，有157管存在凝集程度的差异，其中快速法粗于传统方法的有115管（73.25%），传统方法粗于快速法的有42管（26.75%），快速法较原法敏感，两法比较：差异有非常显著

6、性（P＜0.01），见表2。表2快速法与传统方法凝集程度比较(略)注:χ20.01=6.61，χ20.05=3.84。　　在994管凝集管中，有26管存在凝集与不凝集的差异，其中快速法凝集、原法不凝集的有19管（73.08%），原法凝集、快速法不凝集的有7管（26.92%），两法比较：差异无显著性(P>0.05)。　　5讨论　　震荡后离心切勿高速，高速离心会使全部菌体积沉管底尖部而影响结果的观察，如采用二次离心法效果会更好，即第一次离心观察结果后，再行第二次离心，看结果是否相符，离心速度最好以500r/min以下，这样不凝集的菌体保持混浊。　　本法的凝集管数略多于

7、原法，凝集颗粒也粗于原法，由于受抗体致敏后的菌体在动中（震荡）增加菌体之间的碰撞接触的机会，而形成颗粒凝集而加速沉淀，而原法是在静止的状态下菌体自由沉淀，这可能是本法敏感于原法的主要原因。　　董焕英等［4］也曾介绍过肥达氏试验的离心沉淀法［4］，但是用50℃3水浴需要用专门的水浴箱，在水浴的过程中要不停地用手工振摇而增加操作的麻烦。而本法的最大特点是：操作简单，技术要求不高，所需时间短（20min可发出实验报告），敏感于原法，实验结果与原法无差异（Ｐ＞0.05）,是诊断伤寒、副伤寒的一种较快速、较理想的实验方法之一。　　每10ml菌液加2